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江丽芳

病毒致病与免疫的分子生物学

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姓名：江丽芳
目前身份：
担任导师情况：
学位：
学术头衔：

博士生导师
职称：-
学科领域：

医学微生物学
研究兴趣：病毒致病与免疫的分子生物学

个人简介

　江丽芳，女，教授，博士研究生导师，微生物学教研室主任。
　　1953年出生，1977年中山医科大学医疗系毕业，在中山医科大学从事医学微生物学教学和研究工作20余年。1987年获医学硕士学位，1993年起任教研室主任，1999年任教授，2000年任博士生导师。 1998-1999年在日本九州大学医学部进修病毒分子生物学，2005年10月至2005年12月在美国芝加哥UIC进修医学微生物学。现任中国微生物学会理事、广东省微生物学会副理事长、中华微生物与免疫学会常委、广东省微生态学会副主任委员、《高级医学微生物学》主编（2005年12月教育部推荐本书为研究生教学用书）、《传染性非典型肺炎的预防与控制》副主编、卫生部八年制规划教材《医学微生物学》副主编、卫生部七年制规划教材和五年制规划教材《医学微生物学》编委、《中华微生物与免疫学杂志》编委。
　　江丽芳教授研究方向为病毒致病与免疫的分子生物学，主要研究登革病毒基因结构与功能、登革病毒致病与免疫的分子机理、登革热快速诊断、登革病毒疫苗的研制； SARS-Cov病原学；人禽流感病毒的病原学与防治研究等。先后主持了国家自然科学基金、国家”863”计划、广东省自然科学基金、“211工程” 等资助的相关研究项目10余项，在国内外发表相关论文30余篇。
　　2003年以后，江丽芳教授任广东省防治非典型性肺炎专家委员会委员、非典型性肺炎科技攻关病原学研究组组长、广东省人禽流感病原学与防治研究组组长。2003年荣立“广东省抗击非典一等功”、获 “广州市抗击非典模范”光荣称号。2004年被评为“广东省三八红旗手”。2000年获中山医科大学优秀教学成果一等奖。 2004年获广东省科学技术特等奖。2005年获广东省科学技术三等奖。

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2009-04-27

【期刊论文】23S rRNA基因序列分析及其在细菌鉴别诊断中的应用

江丽芳，洪帮兴，胡玉山，方丹云，郭辉玉

中华微生物学和免疫学杂志，2004，24（3）：241～244，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的研究细菌23S rRNA基因序列的差异，为细菌鉴别诊断和相关研究提供科学依据。方法设计合适的通用引物、寻找恰当的扩增条件扩增常见细菌的23S rRNA基因片段。通过序列测定和运用生物信息学分析不同种属细菌23S rRNA基因的保守序列、变异规律及菌株间种系进化关系。结果扩增出常见引起食源性感染的16属（种）细菌23S rRNA基因片段。部分扩增产物进行了限制性酶切鉴定和序列测定。序列比较研究获得21个23S rRNA的通用保守序列，23S rRNA基因保守序列与变异区在种系间呈间隔分布，大量变异区呈“马赛克”式分布。种系间进化关系与16SrRNA分析结果一致。结论 23S rRNA基因序列的分布规律为进行细菌的鉴别诊断及基因芯片的研制提供了重要的理论和实验基础。

23S rRNA，同源性，遗传学

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2009-04-27

【期刊论文】SARS冠状病毒M 基因的克隆及其表达*

江丽芳，晏辉钧，赵卫，方丹云，周经姣，龙北国，张文炳，郭辉玉，江丽芳**

中国病毒学，2005，20（1）：1～4，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

从SARS冠状病毒（GD322株）组织培养上清中提取RNA，进行RT PCR扩增其M基因并克隆到巴氏毕赤酵母表达载体pPICZ-B，电穿孔法将重组体整合入酵母菌P-pastoris，经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定，取Mut-菌用甲醇诱导表达，SDS-PAGE检测其表达产物。Mut-酵母转化菌经甲醇诱导可分泌表达约6kDa和42 kDa的蛋白质，与SARS恢复期病人血清的免疫印迹证实它们为特异的重组M 蛋白质，且获得的重组M蛋白质具有免疫反应性。

SARS冠状病毒， M基因，克隆，巴氏毕赤酵母，表达

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2009-04-27

【期刊论文】SARS冠状病毒的分离培养与鉴定

江丽芳，赵卫，晏辉钧，方丹云，周经姣.龙北国，吴义芳.周俊梅，梁瑜，张文炳，吴强，郭辉玉

中国病毒学，2003，18（6）：544～547，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

采集急性期病人的咽拭子或漱口液，用Vero、Vero E6、MDCK、Hela、Hep-2等传代细胞，人胚肺二倍体细胞（髓L）和人胚肺（1iP）细胞分离培养严重急性呼吸系统综合症（SARS）的病原体。结果用Vero、Vero E6、MDCK和HP细胞从标本中分离到一株病毒。间接免疫荧光试验发现，恢复期病人血清可与所分离的病毒起反应，在胞膜和胞浆中出现翠绿色荧光；中和试验结果表明，恢复期病人血清能中和病毒对细胞的致细胞病变作用；电镜下可观察到冠状病毒样颗粒；RT-PCR 法可扩增到冠状病毒特异性基因片段，且其核苷酸序列与国内外发表的SARS冠状病毒（SARS-Coy）相应的基因序列相符，同源性达到100%。从传染性非典型肺炎病人的漱口液中分离到SARS冠状病毒，这种病毒与传染性非典型肺炎密切相关。

传染性非典型肺炎， SARS冠状病毒(， SARS-CoV)，，分离培养与鉴定，序列分析

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2009-04-27

【期刊论文】登革病毒2型NSI蛋白DNA疫苗的构建及其免疫效果观察

江丽芳，高阳，方丹云，周俊梅

中华微生物学和免疫学杂志，2003，23（10）：787～791，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的以登革病毒2型（dengue virus 2，DV2）结构蛋白（non-structru]protein 1，NSl）为靶基因，构建DV2-NSl的候选DNA疫苗；并探讨其在小鼠体内诱导特异性体液免疫和细胞免疫的作用。方法将登革病毒2型NSl/NS2a基因片段克隆至含AG强启动子的真核表达载体pCXN2上，构建成重组体pCXN2-NSI/NS2a。在体外将重组质粒转染Cos-7细胞，间接免疫荧光检测其在真核细胞中的表达。大量提取空质粒和重组质粒，进行动物免疫实验。结果重组质粒可在真核细胞中有效地表达NSI蛋白。免疫接种小鼠后可诱发机体产生针对NSI蛋白的特异性体液免疫和细胞免疫。末次免疫前已有抗体产生，4周后达高峰。抗体依赖补体介导的溶细胞作用（antibody-dependent comple-ment-mediated cytolysis，ADCC）试验结果显示产生的抗体在体外具有特异的杀细胞作用。淋巴细胞增殖实验结果显示，实验组小鼠的淋巴细胞增殖能力与对照组比较差异有显著性。流式细胞计数仪（FAcS）检测DNA免疫鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞变化情况，与注射空载体pCXN2的阴性鼠相比，CD4+、CD8+细胞水平有较大升高（P<0.01）。动物保护性实验结果显示，当用致死剂量登革病毒攻击免疫鼠时，有66.6%的免疫鼠受到保护。结论NSI/NS2a基因重组质粒免疫小鼠可以诱发小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答。这些结果为进一步研制登革病毒DNA疫苗提供了参考依据。

登革病毒2型， NSl蛋白，基因克隆， DNA免疫

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2009-04-27

【期刊论文】登革病毒2型E蛋白基因真核表达和DNA免疫的研究

江丽芳，高阳，江丽芳**，方丹云，曾祥凤

中国病毒学，2003，18（3）：201～205，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

将编码登革病毒2型（DV2）氨基末端80%的E蛋白的DNA片段克隆到真核表达载体pCXN2AG强启动子下游，构建成DV2E重组真核表达质粒pCXN-E。间接免疫荧光显示其可在COS-7细胞中表达。ELISA法检测pCxN2-E DNA免疫BALB/c鼠血清中的E抗体变化和维持规律，结果显示三次免疫后2周已有抗体产生，l5周时仍维持较高的水平；血清空斑减数中和实验显示其中和滴度高于1∶640：流式细胞计数仪（FAcs）检测DNA免疫鼠CD4、CD8 T淋巴细胞变化情况，与注射空载体pCXN2的阴性鼠相比，CD4淋巴细胞水平略有上升，CD8+细胞水平有较大升高（P<0.01）；动物保护性实验结果显示，当用致死剂量登革病毒攻击免疫鼠时，其保护率为60%。以上结果表明：pCXN2-E在实验动物内表达出的DV2E蛋白可以诱导免疫动物的体液免疫和细胞免疫应答，尤其是MHC.I限制性杀伤性CD8 T淋巴细胞水平的提高对清除病毒是十分有利的。因此，DV2 E DNA免疫为登革病毒DNA疫苗的发展进行了有益的探索。

登革病毒2型(， DV2)，， E蛋白，基因克隆， DNA免疫

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2009-04-27

【期刊论文】登革2型病毒海南分离株全长E基因的测定与分析

江丽芳，周俊梅，高阳，薛耀华，方丹云

中华微生物学和免疫学杂志，2003，23（4）：304～306，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的测定我国登革2型病毒海南分离株E基因的全序列，并分析其病毒学特性和分子进化特征。方法运用RT-PCR法扩增我国登革2型病毒海南分离株（D2V-HN89）E基因，测序并用计算机分析序列，作毒株感染细胞及乳小白鼠试验。结果 D2V-HN89株E基因核苷酸全长1464bp，核苷酸和氨基酸序列与D2V-NGC株的同源性分别为95%和98%，系统树分析显示其与登革2型牙买加株及登革2型巴西90株的亲缘关系最近。D2V-HN89株的细胞病变效应与D2V-NGC株相同，但对乳白鼠神经毒力较弱。结论 D2V-HN89株的E基因区有缺失，该流行毒株可能来源于牙买加或巴西登革热流行区。

登革病毒， E基因，系统树

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2009-04-27

【期刊论文】Ⅱ型登革病毒E基因的克隆及其酵母表达*

江丽芳，薛耀华，魏惠永，方丹云，郭辉玉

中国人善共患病杂志，2003，19（6）：31～33，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的克隆2型登革病毒E基因并用酵母真核表达，获得全长的重组E蛋白，为其结构与功能的研究提供条件。方法从感染DEN2（NGC株）后病变的C6/36细胞上清中提取RNA，通过RT-PCR扩增E基因片段，与载体pPICZaB连接筛选得到重组质粒，电穿孔法将重组体整合入酵母菌P. pastoris，经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定，取Mut菌诱导表达，SDS-PAGE、免疫印迹检测表达产物。结果 RT-PCR得到1.5kb的E基因片段，酶切鉴定与测序显示重组质粒含DEN2全长E基因；Mut 酵母转化菌可分泌表达约69kDa的蛋白，与DEN2 E单抗的免疫印迹证实它为型特异的重组E蛋白。结论成功将克隆的全长DEN2 E基因在酵母菌中表达，获得的重组E蛋白具有免疫反应性。

登革病毒， E基因，克隆，酵母菌，表达