目的 获取番茄果实特异性E8启动子基因，为实现外源基因在转基因番茄中果实特异性表达做准备。方法 培养中蔬5号（Zhongshu No.5）番茄幼苗，采集叶片，用Omega公司的植物基因组提取试剂盒提取番茄基因组DNA；设计引物，从基因组中通过PCR扩增获得番茄果实特异性E81.1和E82.2启动子基因；克隆进pGEM-T载体，酶切鉴定；送上海基康公司测序；序列分析。结果 从番茄基因组DNA中PCR扩增得到预期大小的启动子片段；构建重组pEGM-T-E81.1和pGEM-T-E82.2载体，经酶切证实具有与目标片段长度相符的插入片段；测序结果分析显示；番茄果实特异性E8启动子序列高度保守，所获得的Zhongshu No.5 E82.2启动子DNA序列与Deikman报道的Cherry种的E82.2启动子同源性为99%，登陆GenBank, ID号为AF515784.结论 成功获得Zhongshu No.5番茄果实特异性E81.1、E82.2启动子基因，为下一步转基因番茄口服疫苗的研制奠定了一定的工作基础。

目的　将弓形虫SAG1基因截短片段(t-SAG1)，分别用植物组成型E35S启动子和番茄果实特异性E8启动子驱动，构建t-SAG1植物表达载体。方法　自本室构建的p ET32a-t-SAG1载体中PCR扩增得到t-SAG1基因，克隆进T载体为pMD-T-t-SAG1，酶切鉴定后进行测序确认。用Bam H Ⅰ单酶切连接方式将t-SAG1分别亚克隆进pB35MG、pB35E1MG、pBE2MG载体，分别构建中间载体pB35-t-SAG1、pB35E1-t-SAG1、pBE2-t-SAG1载体。其中，pB35-t-SAG1以E35S 驱动t-SAG1，3′端携带NOS3′终止子序列，组成E35S/ t-SAG1/ NOS3′操纵子结构单元。pB35E1-t-SAG1含E35S和番茄果实特异性E8 启动子核心序列E81. 1 双启动子驱动t-SAG1，组成E35SE81. 1/ t-SAG1/ NOS3′操纵子结构单元。pBE2 t-SAG1以番茄果实特异性E8启动子全长E82. 2 驱动t-SAG1，组成E82. 2/ t-SAG1/ NOS3′操纵子结构单元。pB35-t-SAG1、pB35E1-t-SAG1、pBE2-t-SAG1经酶切证实后，分别将其中E35S/ t-SAG1/ NOS3′、E35S - E81. 1/ t-SAG1/ NOS3′、E82. 2/ t-SAG1/ NOS3′操纵子结构单元以Hind Ⅲ单酶切连接方式亚克隆进pCAMBIA2300质粒中，构建植物表达载体pC35-t-SAG1、pC35E1-t-SAG1、pCE2-t-SAG1，酶切鉴定。含三种启动子驱动t-SAG1的植物表达载体转化根癌农杆菌LBA4404感受态细胞后，PCR 鉴定农杆菌中的t-SAG1。结果　重组质粒用酶切鉴定均得到预期大小片段：CR鉴定转化入根癌农杆菌LBA4404的t-SAG1基因扩增得到预期700bp大小片段：pMD-T-t-SAG1测序结果表明t-SAG1基因序列完全正确，读码框正确。结论　成功构建t-SAG1中间载体pB35-t-SAG1、pB35E1-t-SAG1、pBE2-t-SAG1，以及植物表达载体pC35-t-SAG1、pC35E1-t-SAG1、pCE2-t-SAG1，并将三种植物表达载体成功导入根癌农杆菌，为弓形虫转基因番茄口服疫苗的研究奠定了基础。

目的 构建弓形虫多表位基因（TGMG）植物表达载体。方法 ①将TGMG亚克隆人pBAC55构建中间载体pB35MG，再将其中E35S/TGMG/NOS3'结构单元亚克隆人pCAMBIA2300构建植物表达载体pC35MG。②将番茄果实特异性启动子E81.1插入pB35MG构建中间载体pB35E1MG，再将其中E35SE81.1/TGMG/NOS3'结构单元亚克隆人pCAMBIA2300构建植物表达载体pC35E1MG。③将番茄果实特异性启动子E82.2插入pB35MG构建中间载体pBE2MG，再将其中E82.2/TGMG/NOS3'结构单元亚克隆人pCAMBIA2300构建植物表达载体pCE2MG。测序鉴定pB35MG、pC35E1MG、pCE2MG中的TGMG序列。④pC35MC、pC35E1MG、pCE2MG转化根癌农杆菌LBA4404.结果 重组质粒用酶切鉴定均得到预期片段，pB35MG、pC35E1MG、pCE2MG测序结果正确。结论 成功构建TGMG中间载体pB35MG、pB35E1MG、pBE2MG，以及植物表达载体pC35MG、pC35E1MG、pCE2MG。并将3种植物表达载体导入根癌农杆菌。

目的 在大肠埃希菌中可溶性表达日本血吸虫P38（SjP38）抗原分子，并以其纯化产物为抗原，制备抗SjP38单克隆抗体(McAb）。方法 将pET32（a）-P38重组质粒转化大肠埃希菌BL21（DE3），在1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导下表达，超声破菌后获得可溶性表达产物，通过镍柱一步法纯化，以纯化的重组SjP38为抗原，免疫BALB/c小鼠，采用杂交瘤技术制备McAb，用ELISA和有限稀释法筛选出高分泌滴度McAb杂交瘤细胞株，测定其免疫球蛋白亚类及其效价，蛋白质印迹法（Western blotting）分析其特异性。结果 筛选出能稳定分泌抗重组SjP38单克隆抗体的8株杂交瘤细胞株，均为IgG1；Western blotting分析显示8株单抗能与日本血吸虫虫卵抗原中的天然P38发生特异性结合。结论 制备的抗P38杂交瘤细胞株能分泌高滴度、高特异性的McAb。

为获取有效的日本血吸虫病早期诊断靶抗原分子。以感染前和感染后2周、4周、6周兔混合血清以及急性、慢性日本血吸虫病人和正常人血清，用Western blot对日本血吸虫成虫可溶性抗原（AWA）和虫卵可溶性抗原（SEA）进行了全面的分析与筛选。SEA 140kDa和AWA 54kDa、21kDa、20kDa分子出现最早，能被感染后2周兔血清所识别；SEA 69kDa、50kDa、45kDa、38kDa 和AWA 72kDa、45kDa、34kDa、15kDa相继能被感染后4周兔血清所识别；其中SEA 140kDa、50kDa、45kDa、38kDa和AWA 34kDa、21kDa、54kDa、15kDa与病人血清反应同6周兔血清反应效果相仿，均为免疫反应主带，且在SDS-PA GE上有对应的蛋白主带，具有潜在的早期诊断价值。进一步对SEA进行抗体类型的分析，发现SEA能刺激机体产生IgG、IgM 和IgA反应，其中SEA 50kDa、45kDa、38kDa三个抗原分子均能被IgG、IgM、IgA三种抗体所识别，且均为反应主带；SEA 140kDa以IgM反应带最深；SEA 100 kDa反应带仅出现于病人血清，以IgM反应最强，且其与IgM反应带在急性病人血清明显深于慢性病人血清，表明针对IgM的SEA 100kDa分子也具有一定的早期诊断和区分病程的价值。SEA 140kDa、50kDa、45kDa、38kDa 和AWA 34kDa、21kDa、54kDa、15kDa和针对IgM的SEA 100kDa分子是具有潜在早期诊断价值的优势靶抗原分子。