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2005年07月14日

李庆阁，扈庆华，郑薇薇，石晓路，叶宝英，王冰，庄志雄，刘小立

CHfNA TROPlCAL MEDICINE Vol. 4 No.4 Angnst 2004，-0001，（）：

-1年11月30日

目的建立改良分子信标-实时PCR检测霍乱弧菌的快速方法，应用于霍乱监测。方法根据GenBank公布的霍乱弧菌肠毒素基因A亚单位(ctxA)的保守序列，设计一对引物和改良分子信标探针，并进行特异性和灵敏度分析；同时以11种细菌作对照，建立改良分子信标检测霍乱弧菌的实时PCR反应体系，应用于霍乱监测。结果霍乱弧菌改良分子信标检测体系检测12种细菌，只有霍乱弧菌有荧光信号，与其他细菌无交叉反应，DNA灵敏度为102.4fg/ul，菌液灵敏度为32cfu/ml或3cfu反应体系，对100份海产品和30份腹泻病人大便标本进行检测，结果都为阴性。检测时间仅需2h结论改良分子信标-实时PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强，可用于霍乱的快速诊断，为霍乱的分子流行病学调查提供新的检测手段。∀

霍乱弧菌，改良分子信标，实时PCR，快速检测

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2005年07月14日

【期刊论文】实时检测限制性内切酶活性的发夹型荧光探针

李庆阁，张永有，李庆阁*，梁基选，朱艳冰

ACTA BIOCHIMICA et BIOPHYSICA SINICA 2002, 34 (3): 329-332，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

基于分子信标的原理，设计了一种发夹型荧光探针作为限制性内切酶作用的专一底物，来研究限制性内切酶的剪切作用。检测Bg/II和NcoI表明，这种探针不仅可以灵敏、实时地指示内切酶的活性，采用不同荧光标记的探针还可以同时特异地显示双酶切反应中两个酶各自的活性。并且以Rotor2Gene 2000实时荧光PCR仪作仪器检测，实现了高通量的操作。利用其特有的作变温曲线的功能，能很好的区分限制性内切酶与发夹型荧光探针的特异剪切与非特异的结合。

限制性内切酶，发夹探针，实时检测

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2005年07月14日

【期刊论文】双链探针同步荧光技术快速筛查C282Y点突变

李庆阁，张永有，栾国彦，梁基选

HE REDITAS (Beijing) 25 (1): 9～13, 2003，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

以荧光染料Eam和Joe分别标记野生型和突变型双链探针作为均相检测探针，以构建的DNA模板作为研究模型采用固定波长差同步荧光分析法对PCR反应产物进行终点检测，通过对HFE基因C282Y点突变的检测，并以限制性内切核酸酶Rsa1证实，该方法是一种廉价、快速、可靠的筛查遗传性血色病基因C282Y突变的方法，该法可扩展到各种基因的突变检测。

遗传性血色病，双链探针，同步荧光，基因突变筛查

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2005年07月14日

【期刊论文】双链置换探针实时PCR用于DNA池的等位基因频率测定

李庆阁，程金平，梁基选，李庆阁*

厦门大学学报(自然科学版)，2004，113～118，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

结合荧光双链置换探针的特异性和实时PCR的准确定量能力，建立了一种新颖、准确、价廉且高通量的测定DNA池等位基因频率的方法，该方法采用不同荧光标记的双链置换探针1次PCR反应即可测定出等位基因频率，实验以β-地中海贫血CDs41-42(-TCTT)突变为对象分别用荧光染料FAM和ROX标记野生型和突变型探针，由实时CR检测建立的等位基因浓度与循环阈值的响应曲线计算DNA池的等位基因频率，结果表明，建立的系列等位基因浓度与循环阈值呈线性关系，线性相关系数分别为0.9977(野生型等位基因)和0.9938（突变型等位基因），可检测的最低等位基因频率达1%等位基因频率在1%～90%范围内测定误差小于4%该方法可广泛用于流行病学调查、遗传连锁分析以及全基因组连锁不平衡扫描等领域。

双链置换探针，实时PCR， DNA池，等位基因频率

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2005年07月14日

【期刊论文】双重实时PCR快速同时检测霍乱弧菌和副溶血弧菌

李庆阁，扈庆华，郑薇薇，石晓路，王冰，庄志雄，刘小立，贺连华，吴平芳

中华微生物学和免疫学杂志，2004，24（12）：1004～1007，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的建立改良分子信标2双重实时PCR同时检测霍乱弧菌和副溶血弧菌的快速方法，应用于霍乱监测、副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法根据GenBank公布的霍乱弧菌肠毒素基因A亚单位（ctxA）和副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因（TDH）的保守序列，分别设计引物和改良分子信标探针，以10种细菌作对照，建立双重实时PCR2改良分子信标检测体系，应用于副溶血弧菌食物中毒快速诊断和霍乱监测。结果改良分子信标2双重实时PCR 反应体系DNA灵敏度为102.4～166.6fgPμl，菌液灵敏度为32～64CFUPml或3～6CFUPPCR反应体系，无交叉反应。此反应体系同时检测40株副溶血弧菌和50株霍乱弧菌，均出现特异的荧光信号，两种细菌检测互不干扰。对3起细菌性食物中毒共48份样品和100份海产品进行检测，9份副溶血弧菌实时PCR阳性，其中7份副溶血弧菌细菌培养阳性，其余样品都为阴性。从样品处理到检测结果仅需1天时间。结论改良分子信标2双重实时PCR 检测体系快速、灵敏度高、特异性强，可用于霍乱和副溶血弧菌食物中毒的快速诊断，为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。

霍乱弧菌，副溶血弧菌，改良分子信标，双重实时PCR，同步检测

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