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2005年10月12日

【期刊论文】副粘病毒融合蛋白分子上特异性细胞融合作用位点的初步确定

王志玉

中华微生物学和免疫学杂志,2000,20(4):289~292,-0001,():

-1年11月30日

摘要

目的 找到副牯病毒融合蛋白(F)分子上与血凝素-神经氪酸酶(HN)相互作用的特异性区域,弄清F融合细胞的分子机理。方法 采用基因定点突变法,创造一个酶切位点,得副突变株,然后用基因重组的方法得到各种重组株。并于真棱细胞内进行表达。Gimsa染色和指示基因法检测细胞融合功能,荧光强度分析(FACS)检测表达效率情况。结果 在将各有关F基因片段进行交换之前,创造一个酶切位点时所得突变株的细胞融合功能与野毒株相同;将新城疰病毒(NDV)F和副流感病毒(PIV)F在膜穿人部分和躯干部分交接处交换时。不影响细胞融合功能;进一步将F2进行交换时,也不影响细胞融台功能;而将F的头部进行交换时。则检测不到细胞融合作用,FACS分析表明,F没有达到细胞表面,结论 F分子上与HN相互作用的特异性区域位于膜穿大部分和躯干部分交接处与F1和F2交接处之间,即F1除去膜穿人部分和足部的剩余部分。

副牯病毒, 融合蛋白, 细胞融台, 基因

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2005年10月12日

【期刊论文】副粘病毒融合蛋白活性位点中亮氨酸基因突变分析

王志玉

病毒学报,2000,16(1):12~16,-0001,():

-1年11月30日

摘要

为了确定副粘病毒融合蛋白(F)分子上活性位点中亮氨酸在F的细胞融合作用中的作用。弄清F融合细胞的分子机理,采用基因定点突变法创造一个酶切位点,用酶切反应初步筛选突变株,然后用DNA序例分析进一步确定,并在真核细胞内时行表达,Giemsa染色和指示基因法检测细胞融合功能,荧光强度分析(FACS)表达效率。结果表明,hPIV3F第460位亮氨酸(L)和第474位亮氨酸(1)分别突变成丙氨酸(A)(L460A和147A)时,细胞融合功能分别只相当于野毒株的51.24%和48.73%;而第467位L和第481位L分别突变成A(L1467A和L481A)时,细胞融合功能则无明显改变;当第460和467位L同时突变成A(L460A-L467A)时,细胞融合功能降低了79.13%;而474位1和第481位L同时突变成A(1474A-L481A)时,细胞融合功能无明显改变。NDV F第481位L和488位L分别突奕成A(L481A和L488A)时,细胞融合功能分别降低了75.22%和80.04%;将二者共同突变时,则进一步降低,只有野毒株的10.13%。各突变株的表达效率没有改变。说明F分子上与HN相互作用的L,突变后细胞融合作用不同程度下降。

副粘病毒, 细胞融合, 细胞融合, 亮氨酸, 基因

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2005年10月12日

【期刊论文】用指示基因法定量分析副粘病毒包膜糖蛋白所致的细胞融合

王志玉, 于修平

中华实验和临床病毒学杂志,2001,15(2):179~181,-0001,():

-1年11月30日

摘要

目的 建立一种定量分析副粘病毒包膜糖蛋白融合细胞功能的方法。方法 将vTF-7重组痘苗病毒感染BHK21细胞后,分别转染侍测基因DNA和pCIN17β-gal DNA,16h后将两个细胞群混合,37℃ 15h后用NP-40裂解细胞。取上清进行显色反应,在SOFTMAX软件支持下用ELISA自动测定性在570mm测吸光度A值。结果 指示基因法与细胞计数法有密系,r=0.9890(P<0.01);与面积断法的符合率达100。最佳主要应成条件包括:16mmol/L底物浓度;显色反应20~25min;1μgDNA转染量;每种细胞量接种1×105个。结论 指示基因法是一种非常敏感、特异、可重复性好的细胞融合定量分析方法。可用于副粘病毒细胞融台作用功能的研究。并可作为其他病毒细胞融合作用研究的参考,具有较大的推广应价值。

副粘病毒, 细胞融合, 定量分折

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2005年10月12日

【期刊论文】Cloning and Sequence Analysis of Envelope Glycoprotein E1 Gene of Rubella Virus, JR23 Strain

王志玉, WANG Zhiyu, XUE Yonglei, WANG Xiaofan, SONG Yanyan, and WEN Hongling

J. Microbiol Immunol, Vol. 1, No.1. Nuvember, 2003,-0001,():

-1年11月30日

摘要

To construct an expression vector containing the E1 glycoprotein gene of rubella virus for the study on the effect of mutation of the E1 gene glyeoprotein and the analysis of phylogenetic differences of sequences,the gene encoding the E1 envelope glcoprotein was amlified from rubella virus, Jinan strain JR23, by RT-PCR and ligated into PMD-18T vector. The clones that camied the E1 gene were identified after amp selection and analysis of restrition enzyme digenstion. After sequencing this gene was analyzed by Danstar and Winstar prograns, and the map of phyolgenetic tree was dramw. The colone of E1 glycoprotein was thus constructed. It was found that the sequence differeces between JR23 strain and the TCRB strain from Japan and those between JR23 strain and Thomas strain of England were rather small with difference values of 0.9% and 1.2% respectively. Yet those between JR23 strain and BRD2 strain from Beijing and those between JR23 strain and XC379 strain from Hong Kong were comperatively larger with difference values of 7.6% and 7.3% resoectivesly. The sequece of JR23 strain with other strains was less than 3% except the NC strain (3.7%). It concludes that the construction of E1 glcoprotein gene offers an approach to study the relationship between structures and functions of E1 gene and its gene products. In the phlogenetic tree, it shows that there are significant differences in the sequences of rebella vinus isolated in China, and this might be helpful to develop an effective vaccine.

Rubella virus, E1 gene, Phylogenetic tree, Nucleotide sequencing

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2005年10月12日

【期刊论文】风疹病毒分离株在BHK21细胞中的形态与形态发生

王志玉, 宋艳艳, 姚苹, 王桂亭, 许洪芝, 王芃

中国病毒学,1996,11(4):343~347,-0001,():

-1年11月30日

摘要

利用超薄切片电子显微镜技术对本室分离的风彦病病毒(Rv)JR23株在BHK21细胞中的形态及形态发生过程进行了研究。同时与Rv标准野毒株Gos-10作了比较。结果表明,Rv JR23株盛染BHK21细胞后6h开始干细融浆内观察刊病毒鞭粒,96h达到高峰。病毒颗粒呈圆形。有双层脂质包膜包绕,直径45~75nm。核衣壳25~35nm。细胞裴内见到大量病毒相关颗粒,直径20~30nm病毒包膜米白于细胞禁中的空泡膜或细胞膜。被RV感染的细胞袋中还观察到“繁殖复合体”,由膜性结构包绕着许多类似病毒颗粒的囊泡构成。两株RV在形态与形态发生方面未发现差异。

风疹病毒, 形态学,, 形卷发生,, 电子显微镜检查

合作学者

  • 王志玉 邀请

    山东大学,山东

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