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2007年12月19日

【期刊论文】弓形虫多表位基因植物表达载体的构建

周晓红, 陈晓光, 张晓东, 杨培梁, 习佳飞, 胡建军, 王亚楠, 李林, 沈树满

中国寄生虫学与寄生虫病杂志2003年4月第21卷第2期/Chin Parasitol Parasit Dis 2003-04, Vol. 21, No. 2: 106-109,-0001,():

-1年11月30日

摘要

目的 构建弓形虫多表位基因(TGMG)植物表达载体。方法 ①将TGMG亚克隆人pBAC55构建中间载体pB35MG,再将其中E35S/TGMG/NOS3'结构单元亚克隆人pCAMBIA2300构建植物表达载体pC35MG。②将番茄果实特异性启动子E81.1插入pB35MG构建中间载体pB35E1MG,再将其中E35SE81.1/TGMG/NOS3'结构单元亚克隆人pCAMBIA2300构建植物表达载体pC35E1MG。③将番茄果实特异性启动子E82.2插入pB35MG构建中间载体pBE2MG,再将其中E82.2/TGMG/NOS3'结构单元亚克隆人pCAMBIA2300构建植物表达载体pCE2MG。测序鉴定pB35MG、pC35E1MG、pCE2MG中的TGMG序列。④pC35MC、pC35E1MG、pCE2MG转化根癌农杆菌LBA4404.结果 重组质粒用酶切鉴定均得到预期片段,pB35MG、pC35E1MG、pCE2MG测序结果正确。结论 成功构建TGMG中间载体pB35MG、pB35E1MG、pBE2MG,以及植物表达载体pC35MG、pC35E1MG、pCE2MG。并将3种植物表达载体导入根癌农杆菌。

弓形虫, 多表位基因, 番茄果实特异性启动子, 植物表达载体

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2007年12月19日

【期刊论文】日本血吸虫可溶性虫卵抗原38kDa分子Dipstick快速诊断模式的初步建立

周晓红, 陈晓光, 戴琳, 胡旭初, 李华, 刘国章

热带医学杂志2001年第1卷第1期,-0001,():

-1年11月30日

摘要

目的 建立简便的血吸虫病Dipstick快速诊断法。方法 以纯化的日本血吸虫虫卵可溶性抗原(SEA)38kDa分子为诊断抗原,以胶体金标记的鼠抗人lgG为二抗,建立Dipstick快速诊断体系;检测日本血吸虫病人血清,急性期37例、慢性期30例,正常人52例,肝吸虫病人血清30例。结果 所测得的阳性率分别为94.6%、86.7%、1.9%、0%。结论 以SEA 38kDa纯化分子建立的血吸虫病Dipstick快速诊断法具有较好的敏感性和特异性,且简便快捷,有较好的现场应用前景。

日本血吸虫, 可溶性虫卵抗原, 38kDa抗原, 免疫诊断, Dipstick

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2007年12月19日

【期刊论文】弓形虫SAG1基因截短片段植物表达载体的构建

周晓红, 陈晓光, 卢丽琴, 李林, 吴优, 咸鹏, 言慧, 吴琨

中国人兽共患病杂志Chinese Journal of Zoonoses 2004, 20 (8),-0001,():

-1年11月30日

摘要

目的 将弓形虫SAG1基因截短片段(t-SAG1),分别用植物组成型E35S启动子和番茄果实特异性E8启动子驱动,构建t-SAG1植物表达载体。方法 自本室构建的p ET32a-t-SAG1载体中PCR扩增得到t-SAG1基因,克隆进T载体为pMD-T-t-SAG1,酶切鉴定后进行测序确认。用Bam H Ⅰ单酶切连接方式将t-SAG1分别亚克隆进pB35MG、pB35E1MG、pBE2MG载体,分别构建中间载体pB35-t-SAG1、pB35E1-t-SAG1、pBE2-t-SAG1载体。其中,pB35-t-SAG1以E35S 驱动t-SAG1,3′端携带NOS3′终止子序列,组成E35S/ t-SAG1/ NOS3′操纵子结构单元。pB35E1-t-SAG1含E35S和番茄果实特异性E8 启动子核心序列E81. 1 双启动子驱动t-SAG1,组成E35SE81. 1/ t-SAG1/ NOS3′操纵子结构单元。pBE2 t-SAG1以番茄果实特异性E8启动子全长E82. 2 驱动t-SAG1,组成E82. 2/ t-SAG1/ NOS3′操纵子结构单元。pB35-t-SAG1、pB35E1-t-SAG1、pBE2-t-SAG1经酶切证实后,分别将其中E35S/ t-SAG1/ NOS3′、E35S - E81. 1/ t-SAG1/ NOS3′、E82. 2/ t-SAG1/ NOS3′操纵子结构单元以Hind Ⅲ单酶切连接方式亚克隆进pCAMBIA2300质粒中,构建植物表达载体pC35-t-SAG1、pC35E1-t-SAG1、pCE2-t-SAG1,酶切鉴定。含三种启动子驱动t-SAG1的植物表达载体转化根癌农杆菌LBA4404感受态细胞后,PCR 鉴定农杆菌中的t-SAG1。结果 重组质粒用酶切鉴定均得到预期大小片段:CR鉴定转化入根癌农杆菌LBA4404的t-SAG1基因扩增得到预期700bp大小片段:pMD-T-t-SAG1测序结果表明t-SAG1基因序列完全正确,读码框正确。结论 成功构建t-SAG1中间载体pB35-t-SAG1、pB35E1-t-SAG1、pBE2-t-SAG1,以及植物表达载体pC35-t-SAG1、pC35E1-t-SAG1、pCE2-t-SAG1,并将三种植物表达载体成功导入根癌农杆菌,为弓形虫转基因番茄口服疫苗的研究奠定了基础。

刚地弓形虫, SAG1基因截短片段, 番茄果实特异性启动子, 植物表达载体

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2007年12月19日

【期刊论文】以课外科研工作为基础拓展医学生创新综合素质教育空间的探索

周晓红, 陈晓光, 彭鸿娟, 李华, 郑学礼, 吴昆, 王春梅, 沈树满

西北医学教育2006年6月第14卷第3期/NORTHWEST MEDICAL EDUCATION Jun., 2006, Vol. 14, No. 3,-0001,():

-1年11月30日

摘要

对近年来开展医学生课外科研实践进行了回顾性总结与展望,深刻认识到课外科研工作在医学生创新综合素质教育中的重要作用。要达到课外科研工作“扶助学生成才”的目的,就必须对带教老师进行精心的遴选;对学生进行严格的选拔,做到“因材施教”,筛选的学生一定要“富有兴趣,学有余力,确有时间”;然后针对学生综合情况与学生共同精心设计并实施周密的个性化的培养方案。从科研技能、科学思维、科学精神三方面对学生进行循序渐进的培养,拓宽学生视野,教育学生善于求索、勇于创新、诚于协作。

课外科研活动, 创新素质教育, 医学生

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2007年12月19日

【期刊论文】抗重组日本血吸虫P38抗原单克隆抗体的制备与鉴定

周晓红, 吴锦雅, 陈晓光

中国寄生虫与寄生虫病杂志2005年4月第23卷第2期/Chin J Parasitol Parasit Dis Apr., 2005, Vol. 23, No. 2,-0001,():

-1年11月30日

摘要

目的 在大肠埃希菌中可溶性表达日本血吸虫P38(SjP38)抗原分子,并以其纯化产物为抗原,制备抗SjP38单克隆抗体(McAb)。方法 将pET32(a)-P38重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),在1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导下表达,超声破菌后获得可溶性表达产物,通过镍柱一步法纯化,以纯化的重组SjP38为抗原,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,用ELISA和有限稀释法筛选出高分泌滴度McAb杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,蛋白质印迹法(Western blotting)分析其特异性。结果 筛选出能稳定分泌抗重组SjP38单克隆抗体的8株杂交瘤细胞株,均为IgG1;Western blotting分析显示8株单抗能与日本血吸虫虫卵抗原中的天然P38发生特异性结合。结论 制备的抗P38杂交瘤细胞株能分泌高滴度、高特异性的McAb。

日本血吸虫, P38抗原, 可溶性表达, 纯化, 单克隆抗体

合作学者

  • 周晓红 邀请

    南方医科大学,广东

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