目的：建立1种检测表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)基因突变的荧光实时定量PCR的新方法，并探讨应用这种方法检测肺癌组织EGFR基因突变的临床应用价值。方法：通过自行设计探针及引物，应用荧光实时定量PCR方法，检测71例女性非小细胞肺癌患者的肺癌组织中EGFR基因的第19号和第21号外显子上的突变情况，并与直接测序法比较。结果：中国女性非小细胞肺癌的病人中EGFR基因的突变率为30％(21/71)；荧光实时定量PCR与直接测序法的特异度符合率是95％(20/21)，敏感度符合率是100％ ，检测时间为直接测序法的1/12，而且结果判读直观。结论：应用荧光实时定量PCR检测肺癌组织中的EGFR基因特定位点的突变是一种快速、可靠的方法，具有较高的临床应用价值。

目的 分析原发性肝细胞癌(HCC)1号染色体短臂(1p)上10个位点等位基因杂台子丢失(LOH)，以期寻找1P上可能存在的与HCC发生有关的肿瘤抑制基因的缺失区域。方法 用聚合酶链反应(PCR)方法分析38倒HCC的1号染色体短臂l0叶、位点微卫星多态性标记的LOH。所有患者均做HBV5项检测和HCV血清抗体的ELISA法检测。结果 在84.2％(32／38倒)的HCC组织中捡出染色体1P片段的LOH，其中1p31区的DIS186，1p35区的D1S482，和lp36区的DIS243，DIS170。DIS160和DIS165等6个位点发生高频率LOH(>40％)。结论 本组HCC染色体1p等位基因丢失区域主要集中在lp31和lp35-lp36区。这两个区域内可能存在多个与HCC发生有关的肿瘤抑制基因。

背景与目的：有研究表明，在肺癌、乳腺癌等肿瘤组织中，肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)与肿瘤的预后呈负相关。然而在胃癌和部分结直肠癌的研究中得出了TAMs与预后呈正相关的结论。本研究旨在探讨TAMs对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)进展和预后的影响。方法：应用免疫组化技术检测60例鼻咽癌组织中TAMs标记物CD68的表达；分别培养正常巨噬细胞、鼻咽癌细胞株CNE-1和CNE-2以及肺癌细胞株95D，将同浓度的3种癌细胞株的上清液加入同量的巨噬细胞中共培养1天，6天及加入LPS活化后继续培养1天，应用ELISA技术检测共培养后TAMs释放的细胞因子TNF-α和IL-10的表达。以与肺癌细胞株95D上清液共培养后的巨噬细胞作为阳性对照；正常巨噬细胞作为阴性对照。结果：鼻咽癌组织中TAMs高密度表达者的3年无瘤生存率(85.7％)明显高于低密度表达者(56.3％)(P=0.017)。与阳性对照组比较，接受鼻咽癌细胞株CNE-1和CNE-2上清液刺激后的TAMs分泌TNF-α较少(73pg/m1,64pg/ml vs．7794pg/ml,P=O.001)，经LPS活化后明显增多(6905pg/ml,6788pg/ml vs.137pg/ml,P=O.001)；分泌IL-1O很少(1pg/ml,1pg/ml vs.94pg/ml,P=O.002)，经LPS活化后升高不明显(87pg/ml,99pg/ml vs.416pg/ml.P=0/O15)，与阴性对照组比较差异无显著性。结论：鼻咽癌组织中TAMs的密度与患者的预后呈正相关；与鼻咽癌细胞上清液共培养后TAMs分泌的细胞因子倾向于杀伤肿瘤细胞，促进机体的抗瘤免疫作用。

通过构建携带细胞色素C氧化酶基因的RNAi慢病毒载体，获得可供转染的滴度，为下一步研究该基因缺陷在真核细胞中的影响提供物质基础。方法：根据线粒体细胞色素C氧化酶设计的两条互补的单链寡核苷酸退火后形成双链，插入到pENTR/U6质粒缺口末端，连接在质粒上生成含RNAi盒的pENTR/U6载体；通过重组作用将pENTR/U6载体的RNAi盒重组到pLenti6/BLOCK-iT-Dest载体上，构建含U6启动子、靶序列和P0lⅢ终止子表达框的MTCOX-I shRNA表达重组体；经脂质体导入293FT细胞，包装成慢病毒，收集病毒上清并检测其滴度。Western blotting检测干扰后细胞内线粒体细胞色素C氧化酶I亚基的表达。结果：将目的序列成功连接到载体上，并经测序分析证实载体构建成功；成功包装成高滴度的慢病毒。Western blotting检测结果证实构建的MTCOX-I shRNA表达重组体可显著抑制线粒体细胞色素C氧化酶I亚基的表达。结论：成功构建了携带细胞色素C氧化酶基因的RNAi慢病毒载体。