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2009年07月29日

【期刊论文】mMR-1基因的克隆和在毕赤酵母中分泌表达

夏焕章, 李天伯, 胡洋*, 王以光**

生物工程学报, 2005, 21(1): 26~29,-0001,():

-1年11月30日

摘要

hMR-1为本实验室首次克隆发现的一个人类新基因,是一种和三种肌肉收缩蛋白及多种细胞信号蛋白具有相互作用的膜蛋白。经与鼠基因组数据库进行同源分析后设计合成引物,利用RT-PCR技术从小鼠C57BIJ6J脾脏T淋巴细胞总RNA中反转录得到鼠源MR-I基因(mMR-1),提交GenBank,收录号(AY299972)。序列分析证明其与人源MR-1基因(hMR-1)同源性为90.1%。构建表达载体pPIC9-mMR-1电转化Pichia pastoris GS115,筛选得到整合分泌表达mMR-1蛋白的重组酵母菌株。表达目的蛋白分子量25kD,诱导5d时产量达到50mg/L,通过Westem blot验证了表达产物的正确性。本研究为进一步研究新基因MR-1的生物学功能奠定了基础。

MR-1, 克隆与表达, 毕赤酵母

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2009年07月29日

【期刊论文】Identification and Functional Analysis of dTDP-Glucose-4, 6-Dehydratase Gene and Its Linked Gene Cluster in an Aminoglycoside Antibiotics Producer of Strepto,nyces tenebrarius H6

夏焕章, Yu Du, * Tianbo Li, * Yiguang G. Wang, Huanzhang Xia

CURRENT MICROBIOIOGY Vol.49(2004)99-107,-0001,():

-1年11月30日

摘要

Streptomyces tenebrarius H6 produces a variety of aminoglycoside antibiotics. such as apramycin, tobramycin, and kanamycin B. Primers were designed according to the highly conserved sequences of the dTDP-glucose-4,6-dehydratase genes, and a 0.6-kb PCR product was obtained from S. tenebrarius H6 genomic DNA. With the 0.6-kb PCR product as a probe, a BamHI 7.0-kb fragment was isolated. DNA sequence analysis of the 7.0-kb fragment revealed four ORFs and an incomplete ORF. In search of databases, the deduced product of one ORF (orfE) showed 62% identity to the dTDP-glucose-4,6-dehydratase, StrE of S. griseus. Three other ORFs (orfGl, orfG2, and orfGrVD showed 55%. 62%, and 42% similarities, respectively, to glycosyltransferase from Clostridium acetobutylicum and mannosyl-transferase from Xanthomonas axonopodis pv. citri str. 306 and glycosyltransferase from Pseudomonas putida KT2440. Upstream of the orfE was an incomplete ORF, and the deduced product showed 56u/。similarity to dTDP-4-dehydrorhamnose, StrL from S. griseus. The function of the orfE gene was studied by targeted gene disruption. The resulting mutant failed to produce tobramycin and kanamycin B, but still produced apramycin, suggesting that the orjE gene and linked gene cluster are essential for the biosynthesis of tobramycin and kanamycin B in S. tenebrarius H6.

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2009年07月29日

【期刊论文】黑暗链霉菌安普霉素生物合成基因aprG的克隆和功能研究

夏焕章, 王新路, 夏焕章*, 程杉, 张小波

中国抗生素杂志,2004,29(5):260~299,-0001,():

-1年11月30日

摘要

从安普霉索产生菌S. tenebrarius H6总DNA中已克隆得到8.2kb的安普霉索抗性基因连锁片段。对距离抗性基因下游4.5kb的SacI-Sau3AI片段进行测序分析,发现了一个新的891bp开放阅读框架。推测其编码为296个氨基酸的蛋白质。经BLASTX程序分析,没有发现与之同源的基因,是一个新基因,该基因命名为aprG。构建基因阻断穿梭载体pSPU58,经接合转移导入S. tenebrarius H6,筛选单交换阻断变株,并用Southern blot验证阻断变株的aprG已经被破坏。经发酵分析,阻断变株不再合成安普霉素,表明aprG与安普霉素生物合成直接相关。

黑暗链霉菌, 安普霉素, 生物合成基因, 基因阻断

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2009年07月29日

【期刊论文】单组分妥布霉素产生菌的快速筛选

夏焕章, 刘晓辉, 任丹, 熊宗贵

微生物学杂志,2003,23(1):4~5,-0001,():

-1年11月30日

摘要

经多轮筛选获辑了1株妥布霉素耐药安普霉素敏感的芽袍杆菌。利用该菌与枯草杆茵63501混合作为栓定菌,从妥布霉素和安昔霉素二组分产生菌中快速筛选到了单组分妥布霉素产生菌。

黑暗链霉菌, 妥布霉素, 快速筛选

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2009年07月29日

【期刊论文】黑暗链霉菌DNA转移系统的建立*

夏焕章, 吴胜

微生物学报,2002,42(2):182~185,-0001,():

-1年11月30日

摘要

研究了黑暗链霉菌的基因转移系统,探索丁通过PEC-介导的原生质体转化、接合转移向黑暗链霉菌中转人外源DNA的可能性。多次尝试用质粒pU702转化黑暗链霉菌9904原生质体均未成功。对原牛质体进行“热处理”后转化、利用单链DNA转化等都不能将质粒导人黑暗链霉菌中,表明黑暗链霉菌对外源DNA有很强的限制修饰作用。利用接合转移将具有oriT的大肠杆菌。链霉菌穿梭质粒pH2132转人大肠杆菌ET12567(pU28002)中,获得供体苗ET12567(pUZSOa2,pH7132)。将供体菌与预萌发的黑暗链霉菌9904的孢子进行接台转移,成功地将pHZ132转入黑暗链毒菌9904中。质粒pH2132经黑暗链霉菌自身修饰后也可转入黑暗链霉菌9904菌株的原牛质体中,转化率约为10 3/μg DNA(pH7132)

黑暗链霉菌, 转化, 接合转移

合作学者

  • 夏焕章 邀请

    沈阳药科大学,辽宁

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