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2007年05月31日

孙长凯，孙艺平，范明，韩大跃，赵杰，宫德正

中国应用生理学杂志2003; 19 (2)/Chin J Appl Physiol 2003; 19 (2)，-0001，（）：

-1年11月30日

目的：进一步探讨脑内一氧化氮(NO)介质(NO或NO衍生物)在复杂部分性及全身强直阵挛性癫痫发作中的作用。方法：采用红藻氨酸(KA)诱导大鼠癫痫发作，以NO合酶抑制剂L-硝基精氨酸(L-NNA)或NO前体L-精氨酸(L-Arg)予以预处理，观察其癫痫发作行为及海马结构内NO含量(NO2-/NO3-)的变化。结果：给予大鼠惊厥剂量KA(10 mg/kg), 15min时出现湿狗样抖动(WDS), 1～3h出现全身痉挛；经L-NNA(50 mg/kg)或L-Arg(40 mg/kg)预处理的大鼠，注射相同剂量的KA后，其癫痫行为发生明显变化，L-NNA预处理的大鼠癫痫发作行为明显加重，表现为全身痉挛的潜伏期缩短、时间延长、死亡率提高；L-Arg预处理的大鼠癫痫发作行为减弱，WDS和全身痉挛的潜伏期均延长，发作程度减轻、时间缩短,观察时间内无一例死亡。KA给药后30min海马结构内的NO2-/NO3- 含量迅速增多，7d时仍持续增高；与NS预处理组相比，经L-Arg预处理的动物，KA给药后3h及3d，其NO2-/NO3-浓度升高明显。结论：兴奋诱导性癫痫发作过程中内源性NO介质的变化可能具有重要的抗发作作用。

一氧化氮， L-硝基精氨酸， L-精氨酸，红藻氨酸，癫痫

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2007年05月31日

【期刊论文】人NMDA受体主亚基M3-M4环基因片段的高效表达、纯化与鉴定

孙长凯，张玉梅，，范明，李伍举，刘淑红，赵杰，韩大跃，王嘉玺

中国生物化学与分子生物学报2003年10月19(5): 588-593/Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

用基因工程方法获得人N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate, NMDA)受体主亚基M3-M4环靶片段，以此为免疫原，用于进一步免疫原性及相关应用研究。自人脑胶质瘤组织中提取总RNA，采用RT-PCR扩增出人NMDA受体主亚基M3-M4环的基因片段，并按照计算机辅助原核表达载体pBV220中外源基因高效表达的数学模型预测方法，将其进行优化改构。将目的基因克隆到pBV220中，转化大肠杆菌DH5α，升温诱导表达，从蛋白质水平检测重组体在大肠杆菌中的表达情况，通过制备性SDS-PAGE进行纯化，从相对分子质量、免疫反应性、肽质谱指纹分析等方面进行鉴定。结果表明，成功构建了人NMDA受体主亚基M3-M4环的原核表达载体(命名为pBV-NR1L3)，通过基因优化，实现了高效表达。凝胶扫描分析表达量约占菌体总蛋白29%，重组肽纯度达95%以上。

人N-甲基-D-天冬氨酸受体，原核表达，纯化与鉴定

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2007年05月31日

【期刊论文】噬菌体肽库中筛选NMDA受体抗原表位

孙长凯，康晓楠，范明，薛沿宁，邵宁生，赵杰，韩大跃，施广霞

生物化学与生物物理进展/Prog. Biochem. Biophys. 2003；30 (4)，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

为了获得人N-甲基-天冬氨酸受体(NR)主亚基(NR1)M3-M4环B细胞表位，以人NR1分子M3-M4环单克隆抗体MAB363淘筛噬菌体展示随机12肽库，对筛选克隆进行特异性ELISA检测和竞争结合实验分析。从30个克隆中得到一个阳性克隆序列“VHTNPSTWQPIL”(克隆1)，原核表达的NR1 M3-M4环可以与克隆1竞争结合MAB363。固相合成5个表位探针短肽，发现其中只有R(22)LRNPSKD可以与M3-M4环竞争结合抗体，将NPS三个氨基酸残基逐一敲除，缺失N或NP的合成肽和M3-M4环竞争抗体的能力减弱，缺失NPS的合成肽完全没有竞争能力，证明MAB363的表位为NPS，S可能是关键性残基。上述结论为免疫干预防治兴奋毒性脑损害策略的实施提供了一个重要线索和依据。

噬菌体展示， B细胞表位， NMDA受体

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2007年05月31日

【期刊论文】L-硝基精氨酸对红藻氨酸致痫大鼠胶质原纤维酸性蛋白免疫反应性的影响

孙长凯，赵君秋

中西医结合心脑血管病杂志2006年1月第4卷第1期/CHINESE JOURNAL OF INTEGRATIVE MEDICINE ON CARDIO-/CEREBROVASCULAR DISEASE January 2006, Vol. 4, No. 1，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的观察一氧化氮(NO)在癫痫发作早期的抗发作效应及可能的细胞学机制。方法应用一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-硝基精氨酸(L-NNA)对红藻氨酸(KA)致痫大鼠的发作进行干预，同时用免疫组织化学染色方法观察海马结构胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果 KA致痫3h大鼠海马结构GFAP免疫反应性发生区域性增强改变，增强区主要为CA3-CA1锥体细胞层(p)和齿状回门区(h)；L-NNA预处理组上述区域性增强改变更明显，同时致痫大鼠湿狗样摇动(WDS)的潜伏期缩短、Baran评分增加，症状加重。结论内源性NO对KA致痫大鼠GFAP的表达有影响，这可能是NO在KA致痫早期具有抗发作效应的机制之一。

红藻氨酸；一氧化氮；癫痫；L-硝基精氨酸，胶质原纤维酸性蛋白

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【期刊论文】银杏叶提取物对锂-匹罗卡品癫痫大鼠海马结构c-Fos蛋白表达的影响

孙长凯，刘建丰，张天华，周慧玲

脑与神经疾病杂志2005年第13卷第6期，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的：研究银杏叶提取物(GBE)对癫痫的干预作用及其对癫痫大鼠海马结构c-Fos蛋白表达的影响。方法：采用锂一匹罗卡品癫痫(LPS)大鼠模型。观察动物行为改变，应用免疫组化方法观察海马结构c-Fos蛋白的表达。结果：GBE对该模型癫痫发作的预防有效率和治疗有效率分别为94. 44%和35, 48%。与LPS组相比，GBE预处理组的4级以上发作率和发作分级明显下降；站立发作潜伏期延长。注射匹罗卡品后3小时，生理盐水对照组、GBE单独给药组和GBE预处理组大鼠海马结构c-Fos蛋白表达阴性。LPS组和GBE急性给药组大鼠海马结构c-Fos蛋白达阳性。结论：GBE预处理和急性给药两种给药模式均有一定的抗LPS作用，前者明显优于后者。GBE抗LPS作用的机制可能与GBE能抑制海马结构c-Fos蛋白表达有关。

银杏叶提取物，癫痫， c-fos，锂-匹罗卡品，海马结构

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