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【期刊论文】登革病毒2型E蛋白基因真核表达和DNA免疫的研究
江丽芳, 高阳, 江丽芳**, 方丹云, 曾祥凤
中国病毒学,2003,18(3):201~205,-0001,():
-1年11月30日
将编码登革病毒2型(DV2)氨基末端80%的E蛋白的DNA片段克隆到真核表达载体pCXN2AG强启动子下游,构建成DV2E重组真核表达质粒pCXN-E。间接免疫荧光显示其可在COS-7细胞中表达。ELISA法检测pCxN2-E DNA免疫BALB/c鼠血清中的E抗体变化和维持规律,结果显示三次免疫后2周已有抗体产生,l5周时仍维持较高的水平;血清空斑减数中和实验显示其中和滴度高于1∶640:流式细胞计数仪(FAcs)检测DNA免疫鼠CD4、CD8 T淋巴细胞变化情况,与注射空载体pCXN2的阴性鼠相比,CD4淋巴细胞水平略有上升,CD8+细胞水平有较大升高(P<0.01);动物保护性实验结果显示,当用致死剂量登革病毒攻击免疫鼠时,其保护率为60%。以上结果表明:pCXN2-E在实验动物内表达出的DV2E蛋白可以诱导免疫动物的体液免疫和细胞免疫应答,尤其是MHC.I限制性杀伤性CD8 T淋巴细胞水平的提高对清除病毒是十分有利的。因此,DV2 E DNA免疫为登革病毒DNA疫苗的发展进行了有益的探索。
登革病毒2型(, DV2), , E蛋白, 基因克隆, DNA免疫
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江丽芳, 薛耀华, 魏惠永, 方丹云, 郭辉玉
中国人善共患病杂志,2003,19(6):31~33,-0001,():
-1年11月30日
目的 克隆2型登革病毒E基因并用酵母真核表达,获得全长的重组E蛋白,为其结构与功能的研究提供条件。方法 从感染DEN2(NGC株)后病变的C6/36细胞上清中提取RNA,通过RT-PCR扩增E基因片段,与载体pPICZaB连接筛选得到重组质粒,电穿孔法将重组体整合入酵母菌P. pastoris,经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定,取Mut菌诱导表达,SDS-PAGE、免疫印迹检测表达产物。结果 RT-PCR得到1.5kb的E基因片段,酶切鉴定与测序显示重组质粒含DEN2全长E基因;Mut 酵母转化菌可分泌表达约69kDa的蛋白,与DEN2 E单抗的免疫印迹证实它为型特异的重组E蛋白。结论 成功将克隆的全长DEN2 E基因在酵母菌中表达,获得的重组E蛋白具有免疫反应性。
登革病毒, E基因, 克隆, 酵母菌, 表达
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