将编码登革病毒2型（DV2）氨基末端80%的E蛋白的DNA片段克隆到真核表达载体pCXN2AG强启动子下游，构建成DV2E重组真核表达质粒pCXN-E。间接免疫荧光显示其可在COS-7细胞中表达。ELISA法检测pCxN2-E DNA免疫BALB/c鼠血清中的E抗体变化和维持规律，结果显示三次免疫后2周已有抗体产生，l5周时仍维持较高的水平；血清空斑减数中和实验显示其中和滴度高于1∶640：流式细胞计数仪（FAcs）检测DNA免疫鼠CD4、CD8 T淋巴细胞变化情况，与注射空载体pCXN2的阴性鼠相比，CD4淋巴细胞水平略有上升，CD8+细胞水平有较大升高（P<0.01）；动物保护性实验结果显示，当用致死剂量登革病毒攻击免疫鼠时，其保护率为60%。以上结果表明：pCXN2-E在实验动物内表达出的DV2E蛋白可以诱导免疫动物的体液免疫和细胞免疫应答，尤其是MHC.I限制性杀伤性CD8 T淋巴细胞水平的提高对清除病毒是十分有利的。因此，DV2 E DNA免疫为登革病毒DNA疫苗的发展进行了有益的探索。

目的 克隆2型登革病毒E基因并用酵母真核表达，获得全长的重组E蛋白，为其结构与功能的研究提供条件。方法 从感染DEN2（NGC株）后病变的C6/36细胞上清中提取RNA，通过RT-PCR扩增E基因片段，与载体pPICZaB连接筛选得到重组质粒，电穿孔法将重组体整合入酵母菌P. pastoris，经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定，取Mut菌诱导表达，SDS-PAGE、免疫印迹检测表达产物。结果 RT-PCR得到1.5kb的E基因片段，酶切鉴定与测序显示重组质粒含DEN2全长E基因；Mut 酵母转化菌可分泌表达约69kDa的蛋白，与DEN2 E单抗的免疫印迹证实它为型特异的重组E蛋白。结论 成功将克隆的全长DEN2 E基因在酵母菌中表达，获得的重组E蛋白具有免疫反应性。