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2009年04月27日
江丽芳， 周俊梅， 高阳， 薛耀华， 方丹云
中华微生物学和免疫学杂志，2003，23（4）：304～306，-0001，（）：
-1年11月30日
目的 测定我国登革2型病毒海南分离株E基因的全序列，并分析其病毒学特性和分子进化特征。方法 运用RT-PCR法扩增我国登革2型病毒海南分离株（D2V-HN89）E基因，测序并用计算机分析序列，作毒株感染细胞及乳小白鼠试验。结果 D2V-HN89株E基因核苷酸全长1464bp，核苷酸和氨基酸序列与D2V-NGC株的同源性分别为95%和98%，系统树分析显示其与登革2型牙买加株及登革2型巴西90株的亲缘关系最近。D2V-HN89株的细胞病变效应与D2V-NGC株相同，但对乳白鼠神经毒力较弱。结论 D2V-HN89株的E基因区有缺失，该流行毒株可能来源于牙买加或巴西登革热流行区。
登革病毒， E基因， 系统树
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2009年04月27日
江丽芳， 薛耀华， 魏惠永， 方丹云， 郭辉玉
中国人善共患病杂志，2003，19（6）：31～33，-0001，（）：
-1年11月30日
目的 克隆2型登革病毒E基因并用酵母真核表达，获得全长的重组E蛋白，为其结构与功能的研究提供条件。方法 从感染DEN2（NGC株）后病变的C6/36细胞上清中提取RNA，通过RT-PCR扩增E基因片段，与载体pPICZaB连接筛选得到重组质粒，电穿孔法将重组体整合入酵母菌P. pastoris，经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定，取Mut菌诱导表达，SDS-PAGE、免疫印迹检测表达产物。结果 RT-PCR得到1.5kb的E基因片段，酶切鉴定与测序显示重组质粒含DEN2全长E基因；Mut 酵母转化菌可分泌表达约69kDa的蛋白，与DEN2 E单抗的免疫印迹证实它为型特异的重组E蛋白。结论 成功将克隆的全长DEN2 E基因在酵母菌中表达，获得的重组E蛋白具有免疫反应性。
登革病毒， E基因， 克隆， 酵母菌， 表达
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