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李虹, 李婷, 李虹*, 肖丽英, 蒋中华, 李明远
华西药学杂志,2002,17(2):83~86,-0001,():
-1年11月30日
目的 研究新城疫病毒Lasota株(NDV-L)杀伤肿瘤细胞及诱导肿瘤细胞凋亡的作用。方法 通过噬斑形成单位、HA效价、MTT法等方法检测NDV-L对细胞的杀伤作用;通过Giemsa's染色法、倒置相差显微镜、透射电镜、NDV-L凝胶电泳、流式细胞仪检测NDV-L诱导肿瘤细胞凋亡的作用。结果 NDV对肿瘤细胞有选择性杀伤作用。经NDV-L诱导后,肿瘤细胞呈现典型的凋亡特征。结论 NDV除通过自身复制直接杀伤肿瘤细胞外,还具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用。
新城疫病毒, 肿瘤细胞, 细胞凋亡
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【期刊论文】AchR特异性TsF cDNA文库的构建及筛选*
李虹, 李婉宜, 李虹△, 李明远, 龚其美, 肖丽英, 蒋中华
四川大学学报(医学版),2004,34(1):16-19,-0001,():
-1年11月30日
目的 构建AchR特异性TsF cDNA文库并对该文库进行筛选。方法 从建立的分泌AchR-TsF的特异性Ts细胞系中直接提取了TsF PolyA mRNA,反转录合成全长cDNA,以脱磷酸化的kgtl1EcoRI臂为载体,体外包装成噬菌体颗粒并转染E-coli Y1090hsdR,得到cDNA文库,并用TCR-a单克隆抗体膜上免疫印迹法对该文库进行筛选。结果重组噬菌体的滴度约为1.4×102pfu/ml,阳性重组率为86.9%,重组噬菌体DNA的酶切电泳分析证实插入片段大小在0.8~4.0kb之间。初步筛到27个阳性重组噬菌体,其插入片段大小约为1kb左右。结论 该文库的建立有望获得持续高效表达AchR特异性TsF的重组噬菌体。
AchR特异性TsF cDNA文库 蛋白免疫印迹法
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李虹, 李华林, 李婉宜, 肖丽英, 蒋中华, 李明远△, 汪晓东, 张林
四川大学学报(医学版),2004,34(3):409-412,-0001,():
-1年11月30日
目的 观察流感病毒对肿瘤细胞是否具有凋亡诱导作用,并进一步研究FasL在此过程中的作用。方法 流感病毒以20m.o.i.感染Hela、Raji、SMMC-7721和SPc-A-1等肿瘤细胞,于诱导后不同时间观察细胞超微结构改变,DNA琼脂糖凝胶电泳检测梯状条带,PI染色流式细胞仪检测细胞DNA含量,Annexin-V FITC/PI流式细胞仪进行凋亡定量分析,并用生物素一亲和素ELISA测定流感病毒诱导后细胞培养上清中sFasL浓度的变化。结果经流感病毒诱导后,四种肿瘤细胞均显示凋亡的形态学改变,细胞DNA电泳出现梯状条带,流式细胞仪测定表明细胞凋亡率增高,且显示一定的时间效应;在上述过程中,细胞培养上清中sFasL浓度有明显增高。结论流感病毒可诱导上述肿瘤细胞发生凋亡,其发生机制可能与FasL表达增加有关。
流感病毒, 肿瘤细胞, 凋亡, Fas配体
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李虹, 李燕, 李明远, 王林, 蒋中华, 李婉宜
四川大学学报(医学版),2004,35(2):337-339,-0001,():
-1年11月30日
目的 省研究青蒿油是否能诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡。方法 用青蒿油作用于SMMC-7721细胞进行研究,以羟基喜树碱作为阳性对照。生理盐水作为阴性对照,采用Giemsa'S染色法、透射电镜检测细胞形态的改变、流式细胞仪检测细胞凋亡率及琼脂糖电泳检测DNA图谱。结果 100μg/ml青蒿油作用于肝癌细胞24h后,可见典型的细胞凋亡形态学改变即胞浆固缩、核染色质断裂、出现凋亡小体、DNA电泳呈梯形条带及流式细胞仪检测出现亚G峰等。结论 青蒿油有诱导肝癌细胞凋亡的作用。
青蒿油, 肝癌细胞, 凋亡
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【期刊论文】IL-18-PE38重组免疫毒素的原核表达及其鉴定
李虹, 李明远, 蒋忠华, 吕梅励, 张林△
四川大学学报(医学版),2004,35(6):753-756,-0001,():
-1年11月30日
目的 构建绿脓杆菌外毒素PE38融合鼠lL-18基因的原核表达载体并鉴定其表达。方法 首先采用RT-PCR获得小鼠lL-18基因,再通过适当的酶切及连接反应,构建小鼠lL-18与PE38融合基因的原核表达载体PRKL-ILl8-PE38,重组载体经限制性内切酶、PCR及DNA序列测定等证实连接片段的正确性后,再转染感受态大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和蛋白免疫印迹法分别测定其相对分子质量及特异性。结果酶切分析、PCR鉴定和DNA测序等证实,lL-18-PE38免疫毒素的原核表达载体被成功构建,重组载体在大肠杆菌中获得了稳定的表达,表达产物的相对分子质量与预期值一致,且所表达蛋白可被抗lL-18的特异性抗体所识别。结论 lL-18-PE38融合基因原核表达载体的获得,为进一步研究其对Th1细胞的靶向细胞毒性及临床应用奠定了基础。
IL-18绿脓杆菌外毒素重组免疫毒素原核表达
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