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2009年10月21日

王一飞，熊盛，邢少璩，邓宁，张美英，陈文吟，饶桂荣，粟宽源，余宙耀

中华微生物学和免疫学杂志，2004，24（5）：356～359，-0001，（）：

-1年11月30日

目的研究重组人源抗HBsAg单链抗体（HBscFv）在HBV转基因小鼠体内的活性作用，探讨HBV转基因小鼠作为HBsAg特异性抗体的结合活性评价模型的可行性。方法工程菌表达的HBscFv包涵体经固定化金属螯合层析和分子排阻层析两步纯化后，分步透析复性。复性后的HBscFv（0.9g/L）经尾静脉注射HBV转基因小鼠，一定时间后测定鼠血清中HBsAg的浓度，计算抗体注射前后HBsAg浓度下降的百分比（结合率），同时以人血源HBsAb IgG（40U/ml）和生理盐水作为对照。结果两步纯化获得纯度达到98%的重组HBscFv。HBscFv制品能够结合转基因小鼠体内的HBsAg，其结合率为（30.47±9.85）%，与生理盐水组差异有显著性（P<0.001），与HBsAb IgG组差异无显著性（P>0.05）；对照品HBsAb IsG的结合率为（39.00±7.43）%，与生理盐水组差异也有显著性（P<0.001）。比较HBscFv和HBsAb IgG的结合率及其浓度，求得HBscFv的结合效价为31.58U/mg。结论 HBscFv在转基因小鼠体内具有特异性结合HBsAg活性，HBV转基因小鼠可发展为评价HBsAs特异性抗体的体内结合活性的候选模型。

转基因小鼠，乙肝病毒，单链抗体，结合活性，体内

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2009年10月21日

【期刊论文】重组人抑癌相关蛋白核苷二磷酸激酶A的原核表达*

王一飞，冉延超，王一飞△，熊盛，张美英，黄文韬，罗林波，刘秋英

中国病理生理杂志，2004，20（6）：954～959，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的：为提高表达量，简化纯化工艺，获得可用于临床研究的重组人NDPK-A蛋白，构建带有6×His纯化标签的原核表达载体，优化表达条件获得产物高表达并鉴定产物活性。方法：将抑癌基因nm23-H/从质粒pBVNMH1中亚克隆于带有纯化标签的表达载体pQE40中；梯度变化表达条件获得产物高表达；镍离子螯合层析柱纯化目的蛋白；Western blot鉴定产物的免疫原性；HPLC测定产物的激酶活性；鸡胚尿囊膜试验鉴定产物抑制血管新生的生物活性。结果：pQE-40中亚克隆的nm23-H/序列无误；目的蛋白最高表达量可达49.6%；纯化的表达产物能与天然NDPK-A的多克隆抗体特异结合；酶比活为472U/rag；具有抑制鸡胚尿囊膜血管新生的活性。结论：表达质粒-nm23HI能高效表达重组人NDPK-A，纯化工艺简便，产物活性与天然NDPK-A无异。

核苷二磷酸激酶，肿瘤抑制蛋白质类

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2009年10月21日

【期刊论文】达NM23-HI/NDPK-A工程菌的遗传稳定性研究*

王一飞，钱垂文，黄立，王一飞**，熊盛，张美英，李雪玲

中国生物工程杂志，2005，25（2）：35～38，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的：研究重组工程菌的遗传稳定性。方法：利用重组表达质粒pBVNM-HI转化宿主菌E.coli DI-LSa，筛选重组工程菌DH5a-pBVNM-HI。将新构建好的重组工程菌在无选择压力的条件下进行连续传代培养，比较菌落在LB（-）和LB（+）培养基上的生长状况，并对传代菌株目标蛋白的表达情况以及质粒数量和目的基因DNA进行电泳鉴定。结果：重组工程菌连续传代5O次中，在LB（-）和LB（+）培养基上的生长状况相同，目标蛋白表达量无显著差异，质粒数量及目的基因DNA结构稳定。结论：重组工程菌DH5a-pBVNM.HI具有良好的遗传稳定性。

pBVNM-HI DH5a-pBVNM-HI 遗传稳定性

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2009年10月21日

【期刊论文】蓝谷牌鲨鱼口服液对2型糖尿病病人短期病情控制、症状影响研究

王一飞，陈伟

中国卫生检验杂志，2005，15（10）：1243～1245，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的：研究鲨鱼口服液对15名2型糖尿病病人短期病情控制、症状影响。方法：采用单盲、交叉对照等方法，对鲨鱼口服液受试者的血、尿常规，生化指标、血糖及糖化血清蛋白，以及临床症状等指标进行考察，观察时间为20 d。结果：患者在服用鲨鱼口服液可能改善糖尿病的症状，试验前10.7±6.4分，服用口服液后降为5.8±5.3，与安慰剂对比（P<0.05）。同时该试验品对糖尿病患者的肝、肾、心脏功能及血液学功能等无明显不良影响。结论：鲨鱼口服液在2型糖.尿病患者短期应用安全、可能改善症状、应用简便，但对血糖的影响仍需要长期观察。

2型糖尿病，口服液，研究

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2009年10月21日

【期刊论文】灭活SARS病毒的纯化鉴定及初步应用

王一飞，钱垂文，熊盛，张关英，陆家海，张传海，李久香，万卓越，郑焕英，张庶民

现代免疫学，2005，25（2）：152～154，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

为制备纯化的灭活SARS病毒，取广东省CDC提供的灭活SARS-CoV病谳培养液进行超滤，收集相对分子质量介于100000至500000之间的组分。并浓缩。对纯化过程中各组分进行抗原活性签定和蛋白质含量测定。并加佐剂后免疫动物，测定抗体免疫应答。结果表明：超滤后活性抗原蛋白质回收率7.6%，纯化倍数为9，抗原活性达到1∶480 免疫家免获得的血清ELISA效价达到1∶10000以上，中和抗体效价达到1∶2000以上。表明该纯化工艺能获得较高纯度的灭活SARS-CoV病毒颗粒。

SARS-CoV，纯化， ELISA，免疫应答

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