目的探讨人脐血司充质干细胞（menchymal stem cells, MSC）的体外分离、纯化、扩增和 向神经元样细胞的定向诱导分化条件。方法无菌条件下采集正常人脐血，肝素抗凝，用相对密度为 1.077的淋巴细胞分离液分离脐血单个核细胞，进而获得MSC 用MesencultTM培养基进行纯化和扩增 培养。用流式细胞仪检测MSC的表面标志。取扩增2，5，8代的Msc分别向神经元样细胞诱导，免疫 组化和组化法检测神经元样细胞特异性标志和结构。结果脐血Msc每扩增一代，细胞数量增加约2 ～3倍。6.6×105个人脐血原代Msc在体外扩增10代后获得9.9×108个细胞，扩增约l.5×l03倍。 流式细胞仪检测结果显示，脐血Msc不表达CD34、CD11b和CD29，强表达CD29，弱表达CD71，与骨髓MSC 表面抗原特性一致。诱导后的细胞平均有70％左右呈现典型的神经元样表型，免疫组化法检测发现 不同代数的Msc诱导后均表达神经丝蛋白（neurofilament，NF）和神经元特异性烯醇化酶（neuron—specific enolase, NSE）；组织化学法检测可看到神经元特有结构尼氏体。结论脐血Msc在体外有较强的扩增 能力，能够向非司充质类细胞分化。

干细胞是个体生命过程中产生和存在的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的细胞群体。目前，在干细胞工程领域主要以胚胎干细胞和组织干细胞为研究对象，同时随着组织工程的发展，细胞的替代治疗已成为治疗一些疾病的新途径。组织干细胞在体外被扩增和定向诱导为一些所需细胞，然后植入患者体内，用以修复损伤，替代退行性组织，以及改善遗传性缺陷组织的功能。本文结合近几年国内外干细胞的研究进展，主要就组织干细胞的生物学特性及其临床应用前景作一综述。

神经干细胞（NSCs）是神经系统发生的始祖细胞，具有自我更新和多向分化潜能．NSCs 的研究不仅对阐明神经系统发育有重要意义，对神经系统疾病的治疗也提出了新的思路。研究 NSCs定向分化的诱导因素和机制对NSCs的应用具有重要意义，本实验在体外神经干细胞培养鉴 定和扩增的基础上，观察了抗坏血酸（AA）对NSCs定向诱导分化作用，并探讨了分化过程中相关 基因表达的变化和可能的信号传递途径，结果表明AA诱导能明显促进多巴胺能神经细胞特异性 酪氨酸羟化酶（TH）、多巴胺转运子（DAT）111KNA和蛋白表达；NS＆表达PtX3和较弱的Nurrl， 不表达TH，DAT和S1111；诱导后PtX3表达无变化，NurTl，S1111，TH和DAT表达增强．Erk阻 断剂H）98059能阻断AA对Nurrl，TH，DAT mRNA的作用．提示NurTl参与AA定向诱导， AA可能通过Erkl／2信号转导途径起作用．研究为获得足够的治疗帕金森氏病的多巴胺能神经元 提供了新的思路，并对AA定向诱导的机制进行了初步研究，对更好地发挥NS＆移植治疗帕金森 氏病具有重要意义．

骨髓间充质干细胞（MSC）是一类存在于骨髓中的具有多向分化潜能的干细胞，在体外不 仅可以分化为间充质类细胞，而且可以分化为非间充质类细胞研究了人骨髓间充质干细胞的体 外分离、扩增和向神经细胞的定向诱导分化条件从骨髓中分离Msc，用Mesennlt培养基进行 纯化和扩增培养每扩增一代，细胞数量增加约2～3倍，在体外扩增12代后扩增约4 6×10。倍； 诱导不同扩增代数的MSC向神经细胞分化，诱导后的细胞平均有80％以上呈现典型的神经元样表 型免疫组化法检测发现，神经元样细胞强表达神经丝蛋白和神经元特异性烯醇化酶，组织化学 法检测观察到神经元特有结构尼氏体，表明MSC在体外具有向神经细胞分化的潜能

目的研究白介素13与白喉毒素融合蛋白DT389-gULl3-13E13K对神经胶质瘤的靶向杀伤作用，为神经胶质瘤的无创性治疗和常规化疗的替代或补充治疗提供新的途径。方法通过诱导已构建的融合蛋白表达质粒，原核表达并获得IL-13与白喉毒素融合蛋白DT389-hILl3-13E13K。分别通过两种不同方法提纯后，用体内外实验研究不同浓度融合蛋白对神经胶质瘤的靶向杀伤活性。结果所得融合蛋白浓度纯度均达到95％以上。在体外活性实验中。两种复性纯化方法获得的融合蛋白DTm—hILl3一13E13K对神经胶质瘤均有很好的杀伤效果，半数抑制浓度（Ic50）分别达到6×l0-10moL/L和l×l0-8moL/L，杀伤效果达到了国际水平。体内活性测定结果显示，融合蛋白DT389-hILl3-13E13K对神经胶质瘤有一定的抑制作用，但效果并未达到使肿瘤完全消退的水平。结论得到了在体内外都对神经胶质瘤有抑制杀伤作用的特异的靶向治疗融合蛋白。