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2005年04月15日

汪以真，刘光富，初晓娜，韩菲菲

浙江大学学报(农业与生命科学版) 30 (3): 336～339, 2004，-0001，（）：

-1年11月30日

从杜长嘉猪的骨髓中提取基因组RNA，用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增抗菌肽Protegrin-1（PPG-1）基因，获得一条565bp的片断，以pGEM2TEasyvector为载体，将该基因片断克隆到大肠杆菌中L从筛选到的阳性克隆中分离出Protegrin-1基因，测定其序列，并由此推导出氨基酸序列L结果表明：①该片断长565bp，为Protegrin-1基因cDNA的部分序列，序列同源性比较表明，该基因序列与GeneBank登录的Protegrin-1基因序列具有较高的同源性，达到98.8%L②根据所测序列推导其成熟肽由18个氨基酸残基组成，其氨基酸序列与GeneBank登录的Protegrin-1的成熟肽序列完全一致。

猪，骨髓， PPG-1， RT-PCR，基因克隆，序列分析

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2005年04月15日

【期刊论文】小白鼠乳铁蛋白基因片段克隆及不同泌乳阶段乳铁蛋白基因表达的差异

汪以真，韩菲菲，黄海青

浙江大学学报（农业与生命科学版）30（1）：83～88，2004，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

从泌乳期小白鼠乳腺组织中提取总RNA，用反转录酶反转录为cDNA后，根据已报道的小白鼠乳铁蛋白（LF）cDNA设计一对引物，采用聚合酶链式反应（PCR）进行扩增，获得一条897bp的片段，克隆于pGEM2TVector后进行序列分析表明，该片段为LF基因cDNA的部分序列，编码299个氨基酸组成的多肽，是成熟肽的主体部分。本研究得到的基因片段与已报道的小白鼠子宫LFcDNA部分序列的同源性达到99%L以LF基因片断的成功克隆为基础，本实验室构建了一优化的半定量RT2PCR法，以B-actin为内标，研究不同泌乳阶段小白鼠乳腺组织LF基因表达的差异L结果显示，不同泌乳阶段小白鼠LF基因表达有差异，在泌乳第1日，LF基因的表达量较高，从泌乳第1日到泌乳第10日和第18日，LF基因表达量呈下降趋势，到乳腺组织退化的干乳期（泌乳第25日），LF基因表达量又明显升高。

乳铁蛋白，小白鼠，乳腺，基因克隆，半定量RT-PCR，基因表达

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2005年04月15日

【期刊论文】小白鼠乳铁蛋白基因cDNA克隆及序列分析*

汪以真，韩菲菲，黄海青

农业生物技术学报，2004，12（2）：230-231，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

乳铁蛋白，小白鼠，乳腺，基因克隆，序列分析

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2005年04月15日

【期刊论文】哺乳动物抗菌肽及其在畜牧生产上的应用前景

汪以真，韩新燕，许梓荣

中国畜牧杂志，2002，38（4）：52～58，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

抗菌肽是阳离子型活性肽，是哺乳动物防御体系的一个重要组成部分，具有分子量小，热稳定性好。无免疫原性，抗菌谱广等特点，通过改变细菌细胞膜的通透性而发挥抗菌作用，这不同于抗生素通过阻断大分子生物合成的作用机理，因而致病菌不易对其产生耐药性。本文就几种哺乳动物抗菌肽特性、抗菌机理、基因表达及其研究展望和存在问题进行了综述。

抗菌肽，作用机理，基因表达，哺乳动物

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2005年04月15日

【期刊论文】半定量RT-PCR法评定不同生长阶段猪抗菌肽pr-39基因表达差异

汪以真，林文学，许梓荣

农业生物技术学报，2004，12（1）：52～55，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

根据已报道的猪抗菌肽pr-39基因和看家基因β-肌动蛋白（β-actin）基因序列，分别设计pr-j9和β-actiin的引物，探讨了PcR体系中适宜的Mgcl2浓度、循环次数，以及2对引物间竞争情况。实验揭示，要保证半定量RT-PcR的可行性与可靠性，适宜的Mgcl，浓度为25mmol/L，循环次数为29；由于2对引物之间的杂交配对，两对引物需分别进行扩增。根据以上信息构建一优化的半定量RT-PcR法，以β-actin为内标，研究不同生长阶段猪抗菌肽pr-39基因表达的差异。结果显示，不同生长阶段猪pr-39基因表达有差异，从出生到断奶前pr-39表达量呈增加趋势，断奶时表达量下降，断奶后随日龄增加pr-39表达量再逐渐增加。

半定量RT-PcR，猪，抗菌肽， pr-39，基因表达

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