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2006年10月10日

郭雄，张银刚，，师常宏，邹爱民，许鹏

中南大学学报（医学版），2005，30（1）16～20，-0001，（）：

-1年11月30日

目的：构建BMP2/pLEGFP重组逆转录病毒表达载体，并检测其表达的融合蛋白的生物活性。方法：用基因重组技术构建BMP2/pLEGFP重组逆转录病毒表达载体，并通过酶切和PCR鉴定。脂质体法转染COS27细胞，用荧光显微镜检测和Western blotting分析其在COS27细胞表达，细胞活性实验和动物体内异位成骨实验进一步检测融合蛋白的生物活性。结果：经酶切和PCR鉴定重组质粒BMP2/LEGFP构建成功。转染COS27细胞后，荧光显微镜和Western blotting检测均显示融合蛋白在细胞中表达；分泌的产物经细胞活性实验和动物体内异位成骨实验证实具有BMP2和EGFP的双重蛋白活性。结论：基因重组技术成功构建BMP2/pLEGFP重组体，重组体表达的融合蛋白具有GFP和BMP2的双重活性。

BMP2，基因转染，真核表达，生物活性

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2006年10月10日

【期刊论文】携EGEP基因的逆转录病毒包装细胞的分选和滴度测定

郭雄，张银刚，周京军，鱼兵，刘兵

第一军医大学学报，2005，25（1）30～36，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的探讨利用荧光激活细胞分选技术获得有效重组逆转录病毒包装细胞系的方法。方法用脂质体介导pLEGFP转染PA317细胞用荧光显微镜观察转染结果：依据EGFP荧光利用流式细胞仪的分选技术获得多克隆和单克隆源性的包装细胞。并利用PCR、RT-PCR对其鉴定；以NIH3T3为靶细胞。对其滴度进行测定。结果荧光显微镜显示用脂质体介导的方法成功的转染PA317细胞在4次连续流式细胞仪分选后得到了稳定表达的多克隆和单克隆源性的包装细胞。PCR和RT-PCR分别从多克隆和单克隆源性的包装细胞细胞基因组DNA以及多克隆和部分（6/8）单克隆源性的包装细胞培养上清中的重组逆转录病毒RNA中扩增出了插入的EGFP片段。滴度测定显示得到的包装细胞能够产生有效的病毒滴度。结论荧光激活细胞分选技术是获得有效病毒滴度的包装细胞的有效方法。

EGFP，重组逆转录病毒载体，荧光激活细胞分选技术，基因转染

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2006年10月10日

【期刊论文】Bone Mesenchymal Stem Cells Transplanted into Rabbit Intervertebral Discs Can Increase Proteoglycans submitted article.

郭雄， Yin-Gang Zhang， MD， PhD; Xiong Guo， MD; Peng Xu， PhD; Long-Li Kang， PhD; and Jun Li， PhD

CLINICAL ORTHOPAEDICS AND RELATED RESEARCH Number 430, pp. 219-226，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

We sought to determine whether transplanted allogeneic bone mesenchymal stem cells can survive and increase the amount of proteoglycans in intervertebral discs. We used the rabbit intervertebral disc as a model, creating three groups: an uninjected control group, a group injected with saline, and a group injected with 1

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2006年10月10日

【期刊论文】大骨节病患者关节软骨细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2表达分布的特点

郭雄，杨王君，张增铁，曹春霞，莫东旭

中国地方病学杂志，2002，21（5）341～343，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的探讨大骨节病患者关节软骨细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2表达分布的特点。方法采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的脱氧核糖核酸缺口标记法（TUN EL氏法）检测凋亡阳性细胞，利用单克隆抗体免疫组化检测Bcl-2在关节软骨中的表达。结果 ①TUN EL法染色的大骨节病儿童关节软骨凋亡阳性细胞数较正常关节软骨增多，且主要分布在中层。②大骨节病儿童关节软骨Bcl-2的表达显著高于正常关节软骨中的表达，以表层最多，其次为中层；成人晚期大骨节病患者剥蚀的关节软骨表层Bcl-2的表达聚集在软骨细胞团中。结论大骨节病患者关节软骨细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2表达较正常人显著增多。

大骨节病，细胞凋亡，相关调控因子