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2004年12月28日

邢来君，张琦，，李明春，孙颖，马海庭， *

微生物学报，2004，44，（4）：536～539，-0001，（）：

-1年11月30日

将少根根霉中Δ6-脂肪酸脱氢酶基因（RAD6）的起始密码子周边序列作适当的修改，并把修改后获得的片段（RAD6-1）亚克隆到表达载体pYES2.0，构建重组表达载体pYRAD6-1。经测序验证，把pYRAD6-1 转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVScl进行表达分析，同时以空载体pYES2.0和出发序列所构建的pYRAD6作为对照。通过气相色谱（GC）和气相色谱P质谱（GC-MS）分析表明，在pYRAD6和pYRAD6-1转化的酿酒酵母中生成γ-亚麻酸，而pYES210中没有检测到。其中，pYRAD6-1转化的酿酒酵母γ-亚麻酸表达量占细胞总脂肪酸含量的5.23%，而对照pYRAD6转化的酿酒酵母中表达量只占2.64%。

少根根霉,， Δ6-脂肪酸脱氢酶基因,，转译起始密码子,，酿酒酵母,， γ-亚麻酸,，表达

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2004年12月28日

【期刊论文】转基因烟草表达高山被孢霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的研究

邢来君，李明春，刘莉，胡国武，财音青格乐，邢来君*

作物学报，2004，30，（6）：618～621，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

将高山被孢霉ATCC16266Δ6-脂肪酸脱氢酶（D6D）基因亚克隆到植物表达载体pBI121中，构建了CaMV35S启动子驱动的植物表达载体pBMACL6。经根癌农杆菌LBA4404的介导，采用叶盘法转化烟草Xanthi，得到一批转基因烟草植株。转基因植株的PCR和Southern blot分析表明，D6D 基因已经整合到烟草基因组中。脂肪酸GC分析表明，与未转基因的烟草苗对照相比，转基因植株有D6D基因目标产物γ-亚麻酸的产生，说明高山被孢霉的D6D基因在烟草中得到了表达。

高山被孢霉， Δ6-脂肪酸脱氢酶基因，转基因烟草， γ-亚麻酸

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2004年12月28日

【期刊论文】深黄被孢霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因在大豆中的表达

邢来君，李明春，云萍，王广科，胡国武，邢来君①

Acta Genetica Sinica, August 2004, 31 (8): 858～863，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

为在传统的油料作物大豆中产生γ-亚麻酸，从深黄被孢霉中克隆的Δ6-肪酸脱氢酶基因与植物表达载体pBI121连接，构建了重组质粒pBMICL6，采用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统成功的将该基因导入到栽培大豆吉林35、吉林43、吉林47、绥农10、绥农14和黑农37等品种中，获得一批转基因植株。经PCR检测和Southern杂交分析，证明外源基因已导入并整合到大豆的基因组中。Northern杂交结果表明该基因在转基因大豆的mRNA水平上获得表达。对转基因大豆种子进行脂肪酸成分分析，结果表明Δ6-脂肪酸脱氢酶基因获得表达，产生了γ-亚麻酸，其含量最高可达27.067%，这是国内外深黄被孢霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因在大豆中表达的首次报道。

△6-脂肪酸脱氢酶基因，大豆， γ-亚麻酸，农杆菌介导，深黄被孢霉

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2004年12月28日

【期刊论文】深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及序列分析*

邢来君，李明春，刘莉，张丽，胡国武

菌物系统，2001，20（1）：44～50，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

γ-亚麻酸（GLA，C18：3△6，9，12）是由A6-脂肪酸脱氢酶以亚油酸（LA，C18：2△9，12）为底物，在C6位脱氢形成的。由于在人体中，γ-亚麻酸是花生四烯酸、前列腺素类和白三烯类等生理活性物质的前体物，而深黄被孢霉是目前用于微生物发酵生产γ-亚麻酸的主要菌株。本文根据脂肪酸脱氢酶的保守区设计引物，利用反转录聚合酶链式反应从丝状真菌深黄被孢霉中克隆了编码△6-脂肪酸脱氢酶的cDNA，全长为1374个核苷酸，编码457个氨基酸，但与其他位点的脂肪酸脱氢酶不同的是，A6-脂肪酸脱氢酶在其序列的N端特有细胞色素b5（Cytb5）区。这是国际上对深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的首次报道。

深黄被孢霉,， △6-脂肪酸脱氢酶基因,，克隆

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2004年12月28日

【期刊论文】高山被孢霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中的胞内表达

邢来君，李明春，孙颖，张琦，邢来君*

生物工程学报，2004，20，（1）：34～38，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

γ-亚麻酸（GLA）作为人体必需的不饱和脂肪酸，具有重要的营养和药用价值。Δ6-脂肪酸脱氢酶是γ-亚麻酸合成途径中的关键酶。为了在毕赤酵母中建立一种新的合成γ-亚麻酸的表达体系，将高山被孢霉Δ62脂肪酸脱氢酶基因与胞内表达载体pPIC3.5K连接， SacⅠ线性化后电击法转化毕赤酵母SMD1168,获得的转化子经PCR鉴定目的基因已整合到毕赤酵母的基因组中。用甲醇诱导表达，通过脂肪酸气相色谱和气相色谱2质谱（GC2MS）联用分析表明高山被孢霉Δ62脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中获得表达，γ-亚麻酸含量占总脂肪酸的16.26%。

高山被孢霉,， Δ6-脂肪酸脱氢酶,， γ-亚麻酸,，毕赤酵母

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