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诸欣平

寄生虫学，病原体基因诊断及基因疫苗的研究

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姓名：诸欣平
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担任导师情况：
学位：
学术头衔：

博士生导师
职称：-
学科领域：

医学微生物学
研究兴趣：寄生虫学，病原体基因诊断及基因疫苗的研究

个人简介

诸欣平首都医科大学教授、博士生导师、基础医学院副院长、细胞生物系副主任、人体寄生虫学教研室主任。1983年毕业于首都医科大学医学系获医学学士学位， 1986年毕业于首都医科大学获医学硕士学位。毕业后留校任助教、讲师。1991年~1992年考取‘包玉刚奖学金’赴英国利物浦皇家热带医学院做访问学者，1992~1995在英国国家医学研究院(NIMR)从事资深博士后研究，开展欧共体―亚洲科技合作项目《疟原虫的基因诊断及基因分型研究》，和瑞士Stanly Thomas Johnson基金会资助的《恶性疟原虫基因多态性及抗原变异》课题。1995年回国后一直从事寄生虫学的教学工作和病原体基因诊断及基因疫苗的研究。1996年晋升副教授，1999年评为首都医科大学优秀中青年学科带头人，2000年入选北京市跨世纪优秀人才工程。2001年晋升教授。2001年-2002年美国乔治华盛顿大学访问教授，开展旋毛虫基因工程疫苗的合作研究。主持、参加和完成国家、国际合作和市、局级基金多项，在国内外核心期刊发表论文50余篇，SCI收录8篇。主编了《英汉汉英医学分科大词典》, 主编、参编分子生物学和病原生物学等专业书籍、教材8部。申报国家发明专利2项，专利授权1项。研究成果获北京市卫生局科技成果一等奖，军队科技进步二等奖。曾获首都医科大学教学成果二等奖。社会兼职：中国寄生虫学会副理事长、美国乔治华盛顿大学微生物及热带医学系客座教授、中国寄生虫病防治杂志编委、寄生虫与医学昆虫学报编委、北京实验动物科学管理杂志编委，首都医科大学学报编委。

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2005-03-08

【期刊论文】旋毛虫抗原基因Ts88的克隆及鉴定*

诸欣平，杨雅平，杨静，雷丽萍， Pascal Boireau

中国人兽共患病杂志，2004，20（1）：19～21，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的获取旋毛虫具有抗原性的新基因。方法应用旋毛虫免疫血清和人工感染血清对旋毛虫成虫cDNA文库约3×105重组噬菌斑进行筛选。基因克隆、DNA测序及5’-RACE 获cDNA全长；采用ESEE、DNAstar软件及核苷酸序列数据库（GenBank）进行cDNA序列分析。结果与结论免疫筛选成虫cDNA文库，获得3个阳性克隆。其中的Ts88克隆cDNA全长为1966bp，编码484个氨基酸，含有一个PWWP功能结构域及多个抗原表位。Ts88cDNA是一个尚未见报道的旋毛虫抗原新基因。

旋毛虫， cDNA文库，基因克隆，筛选， cDNA末端快速扩增

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2005-03-08

【期刊论文】旋毛虫抗原基因Ts87在真核细胞中的表达*

诸欣平，徐旭娜，诸欣平**，杨雅平，杨静，张路平

中国寄生虫病防防治杂志，2003，2（16）：71～73，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的在体外真核细胞COS7中表达重组质粒pcDNA3.1/Ts87，为旋毛虫病DNA疫苗的研究奠定基础。方法将重组质粒pcDNA3.1/Ts87经脂质体L ipofectam ine介导，体外转染真核细胞COS7，通过细胞免疫组化，细胞裂解物的SDS-PAGE电泳和Western-blot分析检测表达产物。结果重组质粒能够在COS7中表达出约38ku的目的蛋白，并能够被旋毛虫阳性血清特异识别。结论构建的重组质粒可在体外真核细胞COS7 中成功表达。

旋毛虫， COS7细胞，重组质粒，真核表达

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2005-03-08

【期刊论文】旋毛虫成虫抗原基因的原核表达及表达产物的特性分析

诸欣平，杨静，杨雅平， PascalBoireau，詹斌，冯建军， Peter Hotez

中国寄生虫病防防治杂志，2003，1（21）：16～19，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的获得旋毛虫成虫抗原基因的原核表达产物并对其进行纯化及免疫特性分析。方法旋毛虫成虫Ts87基因片段亚克隆入PET228a（+）表达载体，异丙基硫代-B-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达。亲和层析和电洗脱法纯化表达产物，SDS-PAGE、ELISA和Western blotting对表达产物进行分析鉴定，并将纯化的表达产物人工免疫兔。结果SDS-PAGE 结果显示，表达产物为分子量约为40kDa的重组蛋白。纯化后免疫兔获得高滴度的抗血清。该基因重组蛋白可被感染旋毛虫的猪、兔血清及人工免疫兔血清所识别，与感染囊尾蚴、棘球蚴的患者血清或感染日本血吸虫的兔血清不发生交叉免疫反应。结论获得一个新的旋毛虫成虫T s87基因重组蛋白，该蛋白具有特异的抗原性。

旋毛虫，基因表达，纯化，重组蛋白，抗原，鉴定

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2005-03-08

【期刊论文】旋毛虫Ts87重组蛋白诱发小鼠保护性免疫的研究*

诸欣平，丁利，诸欣平**，杨静，王少华，周蕾

寄生虫与医学昆虫学报，2003，4（10）：207～211，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

为了进一步探讨旋毛虫Ts87基因原核表达重组蛋白的保护性免疫作用，本试验用此纯化重组蛋白组分加福氏完全佐剂（FCA）皮下注射免疫NIH小鼠3次，继以旋毛虫感染性幼虫250条攻击，攻击后每周取血清测抗体IgG滴度，第35天计数小鼠肌肉幼虫数。结果显示重组蛋白免疫鼠的肌肉幼虫减虫率为42.3%，血清抗Ts87重组蛋白体IgG的几何平均倒数滴度（GMRT）达到8000以上，均显著高于佐剂组和对照组。Ts87基因表达的重组蛋白可产生明显的保护性免疫作用。

旋毛虫保护性免疫重组蛋白抗原

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2005-03-08

【期刊论文】旋毛虫Ts87抗原的免疫学特性及保护性的初步研究*

诸欣平，杨静，诸欣平**，杨雅平，雷丽萍

动物学杂志，2003，3（38）：52～55，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

应用Western blot 和ELISA 方法对纯化的重组蛋白PET-28a（+）/Ts87 进行免疫学特性鉴定及保护性研究。Westernblot和ELISA结果显示，Ts87抗原可被人工感染旋毛虫的兔血清、病猪血清、病人血清及抗Ts87的兔血清所识别。Ts87抗原免疫BABLPc小鼠，较对照组减虫率为29%，说明Ts87抗原可作为旋毛虫免疫诊断和疫苗的候选抗原。

旋毛形线虫， Ts87抗原，诊断，保护性免疫， ELISA

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2005-03-08

【期刊论文】旋毛虫Ts87基因在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化*

诸欣平，杨静，诸欣平**，杨雅平，詹斌，冯建军， Hotez Peter

中国人兽共患病杂志，2003，19（3）：25～40，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的为进一步研究和应用旋毛虫Ts87基因，本文原核表达了PET-28a（+）/Ts87重组质粒，并纯化鉴定了该蛋白。方法将Ts87基因片段克隆入原核表达载体PET-28a（+），形成重组质粒PET-28a（+）/Ts87，转化后经IPTG诱导得到表达蛋白（约40kDa），利用固定化金属离子（Ni2+）配体亲和层析纯化目的蛋白，进行复性，并用兔人工感染旋毛虫血清鉴定表达产物。结果与结论成功构建了PET-28a（+）/Ts87，SDS-PAGE显示融合蛋白主要以包涵体形式存在，经过亲和层析得到纯化的目的蛋白，经鉴定可被人工感染旋毛虫兔血清识别。

旋毛虫，融合蛋白，纯化，表达，亲和层析

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2005-03-08

【期刊论文】旋毛虫pcDNA3.1/Ts87重组质粒的构建和表达

诸欣平，杨雅平，诸欣平*，杨静，张路平，徐旭娜，黄松， Pascal BOireau

中国寄生虫学一寄生虫病杂志，2003，2（21）：93～95，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的构建和表达旋毛虫重组质粒。方法 PCR法在旋毛虫抗原基因，Ts87两端加上合适的酶切位点和KOZAK序列，与真核表达载体pcDNA3.1（+）连接，构建pcDNA3.1/Ts87重组质粒。采用Lip。fect锄ine介导的细胞外源DNA转染法，把重组质粒导人COs7细胞。分别用肌肉注射和基因枪免疫小鼠。结果和结论成功构建pcD-NA3.1/Ts87重组质粒，并在COs7细胞和BALB/c小鼠体内表达。

旋毛虫， DNA质粒，基因枪，构建，表达

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2005-03-08

【期刊论文】免疫血清、巨噬细胞及补体对体外培养旋毛虫肌幼虫的杀伤作用★

诸欣平，王少华，诸欣平**，杨雅平，杨静，姜洪杰

寄生虫与医学昆虫学报，2003，1（10）：7～10，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

为进一步了解旋毛虫成虫抗原免疫血清在体外对旋毛虫肌幼虫的杀伤情况，采用体外培养方法进行了免疫血清、免疫血清与巨噬细胞、免疫血清与巨噬细胞及补体对旋毛虫肌幼虫的杀伤试验。结果显示：单纯免疫血清对体外培养的旋毛虫肌幼虫无明显杀伤作用，而免疫血清与巨噬细胞或免疫血清与巨噬细胞及补体联合对体外培养的旋毛虫肌幼虫均有杀伤作用，以免疫血清联合巨噬细胞及补体的作用最显著。

旋毛虫肌幼虫免疫血清巨噬细胞补体体外杀伤

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2005-03-08

【期刊论文】免疫筛选旋毛虫cDNA克隆及原核表达★

诸欣平，杨静，诸欣平**，杨雅平，周蕾， PascalBoireau，詹斌，冯建军， Hotez Peter

中国寄生虫病防防治杂志，2003，1（16）：7～9，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的获取旋毛虫抗原的cDNA克隆并进行蛋白的原核表达。方法应用兔抗旋毛虫成虫可溶性全虫抗原血清对旋毛虫成虫cDNA文库进行筛选，并用兔人工感染旋毛虫血清对强阳性克隆进行再筛选。将编号为Ts87阳性克隆的基因片段亚克隆入PET228a（+）表达载体，IPTG诱导表达后用SDS2PAGE电泳分析表达产物。结果免疫筛选获得阳性克隆Ts87；成功构建重组表达质粒PET228a（+）/Ts87。诱导表达该融合蛋白，SDS2PAGE电泳表明，其能表达一分子质量约为40ku的融合蛋白，与预测分子质量相符。结论筛选到cDNA克隆Ts87，与兔抗旋毛虫成虫可溶性全虫抗原血清和兔人工感染旋毛虫血清均产生特异性免疫反应；PET原核表达系统所获重组蛋白为蛋白功能研究奠定了基础。

旋毛虫，免疫筛选， cDNA克隆，原核表达

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2005-03-08

【期刊论文】抗旋毛虫成虫单克隆抗体的制备和保护性免疫的初步研究

诸欣平，高欣，黄敏君，郭增柱，周蕾，姜洪杰

中华传染病杂志，2002，5（20）：297～300，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的获得抗旋毛虫成虫的单克隆抗体（单抗）并初步研究其保护性免疫作用。方法利用杂交瘤技术，用旋毛虫成虫抗原免疫的Balb/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合。用免疫双扩散鉴定单抗亚类，免疫印迹鉴定单抗的特异性。小鼠尾静脉接种单抗进行被动免疫保护实验。结果建立了1株稳定分泌抗旋毛虫成虫单抗的细胞株。杂交瘤细胞培养上清液效价为1：6400，诱生腹水ELISA效价达1：204800。经鉴定单克隆抗体类型为IgM，可以识别旋毛虫成虫、肌幼虫及新生幼虫，相对分子质量约为40000蛋白，并且不与猪蛔虫、血吸虫、包虫、囊虫抗原发生交叉反应。单抗被动免疫后的减虫率为55.63%。结论获得1株具种特异性、保护性的单克隆抗体，为筛选能诱导保护性免疫功能的旋毛虫抗原分子提供了有力的工具。

旋毛虫，成虫，抗体,，单克隆