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2005年05月28日

【期刊论文】Polymorphisms of the prion protein gene (PRNP) in Chinese domestic sika deer (Cervus nippon hortulorum)

赵德明， L. P. Meng*， D. M. Zhao*， H. X. Liu†， J. M. Yang*， Z. Y. Ning*， C. D. Wu* and C. X. Han*

2005 International Society for Animal Genetics, Animal Genetics, 36, 258-286，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

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2005年05月28日

【期刊论文】QUANTiFICATiON OF PRION GENE EXPRESSION IN BRAIN AND PERIPHERAL ORGANS OF GOLDEN HAMSTER BY REAL-TIME RT-PCR

赵德明， Zhang-Yong Ning， De-Ming Zhao*， Jian-Min Yang， Ya-Li Cui， Li-Ping Meng， and Chang-De Wu， Hong-Xiang Liu

Animal Biotechmology, 16: 55-65, 2005，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

Determination of tissue-specific expression of cellular prion protein (prpc) is essential for understanding its poorly explained role in organisms. Herein we report on quantification of prp Mrna in golden hamsters,a popular experimental model for studying mechanisms of transmissible spongiform encephalopahies (TSE), by real-time RT-PCR.Total RNA was isolated from four different regions of the brain and six peripheral organs of eight golden hamsters Prp Mrna copy number were determined using absolute standard curve method with real-time quantitative PCR instrument.I was found that high Mrna levels were present in all four regions of the brain examined,ingunal lymph node showed high level of the expression similar to that in overall brain; spleen, heart, liver, and lung showed moder-ate levels of the expression; and kidney showed the lowest expression. Our result is consist-ent with the potential involveoment of different organs in prion diseases and offers essentialdata for further study of TSE mechanism in this animalmodel.

Prion， Golden hamster， Mrna expression， Real-time RT-PCR

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2005年05月28日

【期刊论文】大熊猫朊病毒基因克隆与序列分析①

赵德明，杨建民②，赵德明③，李宁，宁章勇，郝永新，秦秀慧

高技术通讯，2004，13，29～32，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

根据已报道的哺乳动物朊病毒基因序列设计引物对，采用PCR方法扩增了大熊猫的朊病毒基因，将其克隆到T2Easy载体，序列测定及分析表明所克隆的大熊猫PRNP基因（GeneBank收录号为AF327449）片段为795bp，编码264个氨基酸的前体蛋白，推测其分子量约28.5ku。与已报道的牛（GeneBank收录号为AF455119）、绵羊（GeneBank 收录号为AF367623）的相应序列作比较分析，核苷酸序列同源性分别为99%和83%，其编码的氨基酸同源性均为100%。在所克隆的大熊猫PRNP基因中未发现与朊病毒敏感性连锁的氨基酸多态性位点。

大熊猫，朊病毒， Prion 基因，序列分析

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2005年05月28日

【期刊论文】疯牛病和羊痒病WESTERN BLOT检测方法的建立*

赵德明，王辉暖，赵德明**，宁章勇，杨建民，吴常德，郝俊峰，白玉，王传武，孟丽平

，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

以朊蛋白单抗AH6和碱性磷酸酶标记的酶标马抗鼠二抗建立了疯牛病和羊痒病的Western Blot检测方法。对Western Blot各种反应条件进行摸索，并确定了最佳工作条件，结果表明：当匀浆缓冲液为RIPA时最佳反应条件为浓缩胶内电泳电压为恒压90V，分离胶电泳电压为恒压160V，转印的最佳电压和时间为恒压100V 1.5小时；封闭液为3%BSA时，封闭15分钟，封闭效果最好；AH6的最佳稀释浓度为1：4000，4℃下孵育过夜，马抗鼠二抗的最佳稀释浓度1：1000，室温下孵育30 分钟。采用已确立的反应条件对样品进行检测并与Prionics®-Check WESTERN进口试剂盒的检测结果比较，发现其敏感性为100%，特异性为99.4%，而进口试剂盒分别为100%，100%，与进口试剂盒无显著差异，这为在该基础上建立国产试剂盒提供了条件

疯牛病，羊痒病， Western Blot

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2005年05月28日

【期刊论文】金黄地鼠PrP基因组织特异性表达的研究*

赵德明，宁章勇，赵德明，杨建民，崔亚利，孟丽平，吴长德，秦秀慧，马李颖

，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

金黄地鼠是研究动物传染性海绵状脑病的理想模型动物之一，我们利用实时荧光定量RT-PCR技术，构建标准重组质粒制备标准曲线，对中枢神经系统的4个不同部位及外周6个组织提取总RNA，反转录后进行PrP基因表达的定量。结果发现，脑的四个检测部位都呈现高的表达量；在外周器官中，淋巴结的表达量和全脑相当，脾脏、心脏、肝脏和肺脏呈现中等程度的表达，肾脏的表达量最低。本研究的结果对于探讨朊蛋白的基本功能和不同组织在传染性海绵状病理发生中的作用，提供了基础数据。

金黄地鼠，朊蛋白，基因表达

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