随着全球经济一体化进程的加速，国际贸易和国际交往日趋频繁，动物海绵状脑病在全球扩散的危险性大大增加，疯牛病（BSE）、羊痒病（Scrapie）等在世界范围内呈蔓延的趋势。现在除欧洲外，其它各洲也有报道，BSE、羊痒病等动物海绵状脑病在我国周边国家也呈流行趋势，严重威胁着我国的畜牧业生产。我国虽然至今尚未发现BSE，但因我国幅员辽阔，传入的可能性较高，因此，我们必须提高警惕，建立严密的BSE监测系统，采取主动检测和报告制度。我国政府高度重视对BSE、羊痒病等疫病的检测和监测工作，本实验室于2001年被认定为国家动物海绵状脑病检测实验室，负责检测、监测黑龙江省、内蒙古自治区、辽宁省、吉林省和北京市五省市的BSE检测工作，现将结果报告如下。

Determination of tissue-specific expression of cellular prion protein (prpc) is essential for understanding its poorly explained role in organisms. Herein we report on quantification of prp Mrna in golden hamsters,a popular experimental model for studying mechanisms of transmissible spongiform encephalopahies (TSE), by real-time RT-PCR.Total RNA was isolated from four different regions of the brain and six peripheral organs of eight golden hamsters Prp Mrna copy number were determined using absolute standard curve method with real-time quantitative PCR instrument.I was found that high Mrna levels were present in all four regions of the brain examined,ingunal lymph node showed high level of the expression similar to that in overall brain; spleen, heart, liver, and lung showed moder-ate levels of the expression; and kidney showed the lowest expression. Our result is consist-ent with the potential involveoment of different organs in prion diseases and offers essentialdata for further study of TSE mechanism in this animalmodel.

根据已报道的哺乳动物朊病毒基因序列设计引物对，采用PCR方法扩增了大熊猫的朊病毒基因，将其克隆到T2Easy载体，序列测定及分析表明所克隆的大熊猫PRNP基因（GeneBank收录号为AF327449）片段为795bp，编码264个氨基酸的前体蛋白，推测其分子量约28.5ku。与已报道的牛（GeneBank收录号为AF455119）、绵羊（GeneBank 收录号为AF367623）的相应序列作比较分析，核苷酸序列同源性分别为99%和83%，其编码的氨基酸同源性均为100%。在所克隆的大熊猫PRNP基因中未发现与朊病毒敏感性连锁的氨基酸多态性位点。

以朊蛋白单抗AH6和碱性磷酸酶标记的酶标马抗鼠二抗建立了疯牛病和羊痒病的Western Blot检测方法。对Western Blot各种反应条件进行摸索，并确定了最佳工作条件，结果表明：当匀浆缓冲液为RIPA时最佳反应条件为浓缩胶内电泳电压为恒压90V，分离胶电泳电压为恒压160V，转印的最佳电压和时间为恒压100V 1.5小时；封闭液为3%BSA时，封闭15分钟，封闭效果最好；AH6的最佳稀释浓度为1：4000，4℃下孵育过夜，马抗鼠二抗的最佳稀释浓度1：1000，室温下孵育30 分钟。采用已确立的反应条件对样品进行检测并与Prionics®-Check WESTERN进口试剂盒的检测结果比较，发现其敏感性为100%，特异性为99.4%，而进口试剂盒分别为100%，100%，与进口试剂盒无显著差异，这为在该基础上建立国产试剂盒提供了条件

金黄地鼠是研究动物传染性海绵状脑病的理想模型动物之一，我们利用实时荧光定量RT-PCR技术，构建标准重组质粒制备标准曲线，对中枢神经系统的4个不同部位及外周6个组织提取总RNA，反转录后进行PrP基因表达的定量。结果发现，脑的四个检测部位都呈现高的表达量；在外周器官中，淋巴结的表达量和全脑相当，脾脏、心脏、肝脏和肺脏呈现中等程度的表达，肾脏的表达量最低。本研究的结果对于探讨朊蛋白的基本功能和不同组织在传染性海绵状病理发生中的作用，提供了基础数据。