目的观察反义cubilin RNA对白蛋白刺激人近端肾小管上皮细胞（HK-2）表达单核细胞趋化蛋白（MCP）-1、RANTES的影响。方法应用基因克隆技术构建反义及正义cubilin真核表达载体（pcDNA-ACUB、pcDNA-CUB），酶切鉴定及序列测定证实插入序列是否正确。脂质体DOTAP将其转染至HK-2细胞，流式细胞仪（FCM）检测反义cubilin RNA对HK-2细胞重吸收白蛋白的抑制作用。细胞转染72h后给予高浓度白蛋白（10g/L）刺激24h，细胞ELISA、Western印迹法检测HK-2细胞表达MCP-1、RANTES的变化。结果pcDNA-ACUB转染组白蛋白摄取率较DOTAP组显著降低（P<0.01）。与DOTAP组比较，pcDNA-ACUB转染组HK-2细胞MCP-1、RANTES的表达显著降低（P<0.001）。结论反义cubilin RNA可抑制肾小管上皮细胞对白蛋白的摄取，并能拮抗白蛋白刺激肾小管上皮细胞趋化因子的表达，提示cubilin在白蛋白介导的肾小管上皮细胞分泌趋化因子中起重要作用。

目的探讨白蛋白刺激肾小管上皮细胞表达细胞趋化因子的分子机制。方法免疫组织化学方法检测10例肾病综合征患者和8例单纯血尿患者肾组织白蛋白沉积和MCP-1、RANTES的表达，常规染色观察肾组织病理改变。以DOTAP分别将空载体、正义或反义Cubilin核酸转染至HK2细胞，荧光显微镜观察HK2细胞对白蛋白的摄取情况，Westem blot检测HK2细胞Cubilin、MCP-1和RANTES的表达变化。结果对照组肾组织中肾小管上皮细胞胞浆可见少量白蛋白沉积，MCP-1、RANTES有微弱表达；肾病综合征组肾小管上皮细胞胞浆可见大量白蛋白颗粒，MCP-1和RANTES表达明显增强，并可见肾间质单个核细胞浸润等组织学改变。体外实验，与正义Cubilin组、空载体组和DOTAP组比较，反义Cubilin组Cubilin表达显著下调，HK2细胞的白蛋白吞饮以及MCP-1、RANTES的表达减少。结论肾小管上皮细胞对白蛋白的重吸收增加可能与其趋化因子表达上调有密切关系，其中Cubilin可能具有重要作用。

目的研究肾组织钠/二羧基转运蛋白1（hNaDCl）表达变化与肾结石发病的的关系。方法85例肾结石患者分为、尿枸橼酸正常结石组和低枸橼酸尿结石组。并设50例对照为非结石患者。采用RT-PCR及NoTthem印迹法检测其中部分肾结石患者肾组织的hNaDCl mRNA水平；免疫组化检测hNaDCl蛋白表达的变化；常规生化方法测定血、尿枸橼酸、草酸等生化指标。结果低枸橼酸尿结石组结石复发率（36.1%），显著高于尿枸橼酸正常结石组（16.3%，P<0.01）。hNaDCl mRNA在正常肾组织中有表达，分布于近端肾小管刷状缘；低枸橼酸尿结石患者hNaDCl mRNA/18sRNA比值（0.65±0.21）显著高于对照组（0.36±0.11，p<O.O1）；而尿枸橼酸正常结石患者（0.4±0.13）与对照组比较差异无显著意义（P>0.05）；低枸橼酸尿结石组hNaDCl蛋白表达也显著高于对照组及尿枸橼酸正常结石组（p<0.01），而后两组间差异无显著意义（p>0.05）。低枸橼酸尿结石组尿pH值、尿钠水平显著低于尿枸橼酸正常结石组和对照组；尿钙、尿草酸水平均显著高于对照组，与尿枸橼酸正常结石组无显著差异。结论肾组织hNaDCJ表达上凋可能是低枸橼酸尿的重要原因，与肾结石的形成和复发存在某种内在联系。

目的研究肾组织钠/二羧基转运蛋白I（SDCTI）与低枸橼酸尿的关系以及枸橼酸钾的干预作用，探讨肾结石发病的分子机制和防治措施。方法雄性Wisiar大鼠分为对照组、肾结石组及枸橼酸钾干预组。血、尿枸橼酸和草酸采用酶法测定，Norihem blol检测大鼠肾组织SDCTlmRiYA水平的改变，免疫组织化学观察SDCTI在肾组织的分布及表达变化。结果与对照组比较，肾结石组第3天尿草酸水平显著升高，枸橼酸水平显著降低，同时肾组织SDCTlmRNA及其蛋白水平上调。第7天SDCTlmRNA及其表达产物增加更为显著。同时尿枸橼酸水平进一步降低，尿钙排泄显著增加。87.5%大鼠有中-大量的草酸钙结石形成。第14天上述改变更为明显，结石形成率达100%。柯橼酸钾干预组各时间点尿草酸水平与肾结石组差异无显著性意义，但屎枸橼酸水平显著高于肾结石组及对照组，肾组织SDCTlmRNA及蛋白表达显著低于肾结石组，与对照组差异无显著性意义；结石形成率显著低于肾结石组；肾小管扩张、炎细胞浸润等病变也明显减轻。结论肾组织SDCTI表达上调可能是低枸橼酸尿的重要原因，与肾结石的形成有密切关系。枸橼酸钾可下调肾结石大鼠肾组织SDCT1的表达，对肾结石的形成具有明显的干预作用。

利用DNA重组技术，将编码人钠/羧酸协同转运蛋白l（hNaDCI）抗原表位区（W138-Q219）的cDNA克隆至融合表达栽体pCEX-5 X-I，构建重组质粒pCEX-hNaDCL6。在大肠杆菌BI21中，经IPTC诱导，获得谷胱甘肽巯基转移酶（GST）-hNaDCI重组融合蛋白的表达。以谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和层析，获得纯化的CST-hNaDCI，以此为免疫原制备的抗hNaDCI抗体可特异性识别人类和大鼠肾组织以及小肠组织中天然的钠/二羧酸协同转运蛋白1。利用该抗体，首次证实了hNaDC1基因编码产物分布于人肾组织近端肾小管刷状缘，与大鼠钠，二羧酸协同转运蛋白l（SDCTl）分布一致。