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2005年04月29日

焦新安， Richard LO-man， Edith Dériaud， Sophie Burgaud Brigitte Gicquel， Nathalie Winter， Claude Leclere，刘秀梵

中华微生物学和免疫学杂志，2002，22（1）：53～57，-0001，（）：

-1年11月30日

目的鉴定重组卡介苗表达的MalE蛋白T细胞表位。方法用抗原提呈试验、T细胞增殖试验、ELISPOT试验和表位作图测试重组MalE蛋白的T细胞表位。结果重组BCG. MalE功能性表达了MalE蛋白的4种H-2d限制性T细胞表位。结论在4种表位中，p68～82是重组MalE蛋白的主要T细胞表位，而其余3个为次要表位。

重组卡介苗， MalE蛋白， T细胞表位

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2005年04月29日

【期刊论文】直接酶联免疫吸附法和聚合酶链反应联合检测沙门菌的应用

焦新安，黄金林，潘志明，文其乙，孙林，刘秀梵

中华预防医学杂志，2004，38（5）：331～334，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的通过比较试验，得到准确、快速的沙门菌检测方法。方法 228株沙门菌经过前增菌、选择性增菌后，采用在聚合酶链反应（PCR）和酶联免疫吸附法（ELISA）同时检测，并将2种快速检测方法进行比较研究。结果 PCR法的敏感性优于直接ELISA法，2种方法的检测符合率达99%以上。直接ELISA结合PCR法对饮食行业工作人员健康检查的1546份人粪便样品进行检测，同时以国家标准方法为参照，直接ELISA法的敏感性和特异性达100%和97.14%，PCR法的敏感性和特异性均为100%。结论优化的沙门菌检测程序是对大量样品采用直接ELISA筛检，除去大量阴性样品，阳性样品用PCR法作进一步鉴定；血清型的确定用国家标准方法。

沙门菌，聚合酶链反应，酶联免疫吸附测定

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2005年04月29日

【期刊论文】应用噬菌体肽库技术定位沙门氏菌鞭毛蛋白上属特异性共同抗原表位

焦新安，刘文博，高崧，张扬，潘志明，王芳，张如宽，刘秀梵

畜牧兽医学报，2003, 34 (2), 183-187 ，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

用生物素标记的沙门氏菌属特异性单克隆抗体de7作为分子探针，应用亲和筛选法从噬菌体肽库中筛选该单抗所针对的表位克隆，最终进行定位。经三轮筛选后，用斑点印迹法检测，得到良好的富集效果。通过免疫筛选法从第三轮筛选物中挑取了24个阳性克隆，再以斑点印迹、竞净ELISA进一步鉴定阳性克隆，证实已获得了沙门氏菌鞭毛属特异性共同抗原的模拟表位。测得的序列为SRRSFTTTE，将其与沙门氏菌共毛蛋白氨基酸序列相比较，同源性较小，但在不同血清型沙门氏菌鞭毛蛋白氨基酸序列的I区高度保守序列为RAXXT，且这种序列排列的几率为1/205，因此推断该单抗所针对的表位在该区段上。此外，以阳性克隆免疫Balb/c小鼠，并制备高免血清进行间接荧光检测和竞争ELISA鉴定，结果表明其具有优良的免疫原性和高度的特异性，这亦为模拟表位疫苗的研究提供了新思路。

沙门氏菌，鞭毛蛋白，属共同抗原表位，模拟表位，噬菌体肽库，表位定位

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2005年04月29日

【期刊论文】应用ELISPOT试验测定重组卡介苗诱导的T细胞应答

焦新安，焦新安*，， Richard Lo-man， Edith D'eriaud， Brigitte Gicquel， Nathalie Winter， Claude Leclerc，刘秀梵

中国预防兽医学报，2001，23 （1）：46～49，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

应用免疫磁性分离技术去除免疫小鼠脾脏细胞中CD4+或CD8+T细胞后，在酶联免疫斑点试验中证实表达大肠杆菌MalE蛋白的重组卡介苗（Rbcg·MalE）诱导的T细胞应答是CD4+T细胞依赖的。对MalE、PPD特异T细胞应答的动态分析结果表明，Rbcg·MalE、BCG诱导的特异CD4+T细胞应答存在Th1/Th2平衡转换现象，即起始阶段为Th1应答，一段时间后出现Th2应答，并逐步形成Th1/Th2混合应答。这些结果，为分析杆菌T细胞应答规律提供了新的认识，同时，亦表明BCG是优良的外源搞原表达与运送载体。

ELISPOT，重组BCG， Th1/， Th2应答

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2005年04月29日

【期刊论文】原核真核双表达加强型绿色荧光蛋白质粒的构建

焦新安，张晓明，，潘志明，张小荣，马丽，顾健，郭荣，刘秀梵

扬州大学学报（农业与生命科学版），2000，24（1）：1～4，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

将原核启动子Ptrc和加强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因从EGFP原核表达质粒pYA 33342EGFP上切下，然后将其插入至真核表达质粒pVAX1真核启动子Pcmv的下游，构建成具有真核和原核启动子的双表达杂合质粒pVAXD2EGFP，其长度为3823bp。将pVAXD2EGFP分别转化鼠伤寒沙门氏菌X4550和转染CO S27细胞，应用流式细胞术、可见光谱扫描、SDS2PAGE测定EGFP原核表达；应用荧光显微镜观察EGFP在CO S27细胞内的表达。重组鼠伤寒沙门氏菌X4550（pVAXD2EGFP）表达EGFP的量与仅以原核方式表达EGFP的X4550（pYA 33342EGFP）相当；将质粒pVAXD2EGFP转染CO S27细胞，EGFP可在CO S27细胞核和胞浆表达，在荧光显微镜下发出强烈荧光。结果表明：不仅成功地构建原核、真核表达集中于同一质粒的新型质粒pVAXD2EGFP，而且原核、真核目的蛋白表达量达到很高水平，显示其在新型重组细菌疫苗方面有着诱人的应用前景。

加强型绿色荧光蛋白，双表达质粒，鼠伤寒沙门氏菌

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