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2006年11月16日

詹希美，郑斌，何蔼，易冰，李卓雅，郑焕钦，张瑞琳，詹希美*， *

中国人兽共患病杂志，2004，20（9）：769～789，-0001，（）：

-1年11月30日

目的比较弓形虫不同地理株（RH株、zS2株、GT株）GP-7基因的异同。方法从弓形虫不同地理株的基因组DNA中扩增出GRA7基因，对目的基因用限制性内切酶（Esp31、Cfrl、MboI）酶切并比较。结果PCR扩增出3株弓形虫的目的基因片段大小均在500bp-750bp之间，约711bp。三种限制性内切酶酶切片段的大小均与理论值相符。结论弓形虫不同地理株GRA7基因具有高度保守性。

弓形虫，致密颗粒蛋白7基因，限制性内切酶

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2006年11月16日

【期刊论文】日本血吸虫组织蛋白酶L2基因扩增及克隆*

詹希美，雷智刚，何蔼，李卓雅，孟锦绣，易冰

中国人兽共患病杂志，2003，19（6）：34-37，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的体外扩增日本血吸虫中国大陆株组织蛋白酶L2（SjeL2）的编码区基因序列，将其克隆到真核表达质粒pcDNA3中，为进一步对其进行功能研究奠定基础。方法用TRIZOL分离日本血吸虫成虫RNA，RT-PCR扩增目的基因。将扩增产物定向克隆到真核表达载体pcDNA3中。结果RT-PCR特异性扩增出S）CL2编码区基因序列。其片段大小为lkb左右，经酶切和PCR鉴定表明所构建的质粒pcDNA一CL2中含有所扩增的基因序列。结论RT-PCR扩增的SCL2编码区基因序列与预期长度相符合，成功构建了含CL2编码区基因的真核表达质粒pcDNA-SfCL2。

日本血吸虫，组织蛋白酶， RT-PCR，基因克隆

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2006年11月16日

【期刊论文】抗日本血吸虫循环抗原单链抗体的抗原定位和初步应用*

詹希美，陈代雄，孟锦绣，易冰，何蔼，李卓雅，张瑞琳

中国人兽共患病杂志，2003，19（4）：63-65，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的将获得的抗日本血吸虫循环抗原的单链抗体进行抗原定位和用于诊断。方法用间接荧光抗体试验（IFA）对2株可溶性单链抗体所针对的抗原进行定位；将可溶性单链抗体进行生物素标记后，用于检测急、慢性血吸虫病人血清标本。结果两个特异性单链抗体分别于日本血吸虫成虫的肠管和生殖系统呈现明显的荧光反应。检测急性血吸虫病人血样20份，慢性血吸虫病人血样30份，正常人血样20份。结果用其中1株单链抗体检测急性病人的敏感度为60%，慢性病人的敏感度为36.7%，特异度为90%；以2株单链抗体混合检测急性病人的敏感度为75%，慢性病人的敏感度为56.7%，特异度为85%。结论经抗体库技术制备的单链抗体可用作日本血吸虫病的诊断，单抗组合较单株单抗可提高免疫学检测的敏感性。

日本血吸虫，循环抗原，单链抗体，抗原定位，检测

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2006年11月16日

【期刊论文】刚地弓形虫RH株微线体蛋白MIC3成熟肽的克隆与表达*

詹希美，余南，何蔼，郑小英，申川军，郑斌，郑焕钦，李卓雅，曹爱莲

中国人兽共患病杂志，2005，21（4）：331～334，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的克隆编码刚地弓形虫（Toxoplasmagondii）RH株微线体蛋白MIC3成熟肽的基因，构建原核表达载体DET—MMIC3，并在大肠杆菌BL21株中表达。方法采用PCR技术从刚地弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码微线体蛋白MIC3成熟肽的基因，并克隆到T载体上，经测序鉴定后，将目的基因亚克隆到表达载体pEZ3Oa（+）上，构建质粒pETMMIC3。表达产物用Westemblot进行进一步确认。结果经初步菌液PCR鉴定，提取质粒双酶切鉴定并测序，确认插入T载体的序列为所需的目的序列;亚克隆构建pET-MMIC3，转化到宿主菌大肠杆菌BL21，得到分子量为37.2kDa的重组表达蛋白。westemblot的结果与预测相符。结论成功的克隆并融合表达了刚地弓形虫RH株微线体蛋白MIC3成熟肽，为进一步研究其在弓形虫粘附和入侵中的作用奠定了基础。

刚地弓形虫，微线体，克隆，表达

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2006年11月16日

【期刊论文】恙虫病东方体Karp株56kD表膜蛋白基因的表达及免疫诊断应用研究*

詹希美，赖延东，郑小英，李秀英，何蔼，吴瑜，李卓雅

中国人兽共患病杂志，2004，20（10）：829-832，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的实现恙虫病东方体56kD表膜蛋白的原核表达并评价重组蛋白作为抗原的免疫诊断价值。方法亚克隆技术构建原核表达质粒载体pGEX-Sta56。转化宿主茵BL21（DE3），JPTG诱导表达GST-Sta56融合蛋白。亲和层析纯化融合蛋白，应用ELISA以评价其免疫诊断价值。结果pGEX-StY6经测序鉴定Sta56基因以正确的表达框架连入载体，经过诱导表达得到正确大小的融合蛋白，应用纯化的GST-Sta56的ELISA检测结果与全细胞抗原有很高线性相关性，在小鼠血清检测中敏感性，特异性和准确性分别大于90%，70%和80%。结论成功表达重组的56kD表膜蛋白并可能替代传统的全细胞纯化蛋白。为建立快速、敏感和特异的免疫学诊断奠定了基础。

恙虫病东方体Karp株， 56kD表膜蛋白，原核表达，酶联免疫吸附试验

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