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2006年11月16日

詹希美，雷智刚，孟锦绣，何蔼，李卓雅，易冰

中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2002，20（6）：325-327，-0001，（）：

-1年11月30日

目的分析日本血吸虫组织蛋白酶LI（SjCL1）基因编码区的完整序列，并定向克隆到真核表达质粒pcD。NA3中。方法从日本血吸虫成虫提取总RNA，进行反向巢式RT-PCR，T载体克隆后测序。PCR扩增SjCL1基因的编码区序列，并将扩增产物克隆到pcDNA3质粒的BamHI和XhoI位点上。结果通过反向巢式RT-PCR扩增出332bpSjCL1基因5端序列，测序后与报道的SjCL1基因部分序列拼接，可得到一个编码317个氨基酸的完整编码区序列。PCR特异性扩增出SjCL1编码区基因序列，其大小约为1kb。经酶切、PCR鉴定和测序表明所构建的质粒pcDNh-SiCL1中含有所扩增的基因序列。结论构建了含SjCL1基因的编码区序列的真核表达质粒pcDNA。SjCL1。

RT-I，日本血吸虫，组织蛋白酶L，基因克隆

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2006年11月16日

【期刊论文】恙虫病东方体Karp株56kD表膜蛋白基因的表达及免疫诊断应用研究*

詹希美，赖延东，郑小英，李秀英，何蔼，吴瑜，李卓雅

中国人兽共患病杂志，2004，20（10）：829-832，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的实现恙虫病东方体56kD表膜蛋白的原核表达并评价重组蛋白作为抗原的免疫诊断价值。方法亚克隆技术构建原核表达质粒载体pGEX-Sta56。转化宿主茵BL21（DE3），JPTG诱导表达GST-Sta56融合蛋白。亲和层析纯化融合蛋白，应用ELISA以评价其免疫诊断价值。结果pGEX-StY6经测序鉴定Sta56基因以正确的表达框架连入载体，经过诱导表达得到正确大小的融合蛋白，应用纯化的GST-Sta56的ELISA检测结果与全细胞抗原有很高线性相关性，在小鼠血清检测中敏感性，特异性和准确性分别大于90%，70%和80%。结论成功表达重组的56kD表膜蛋白并可能替代传统的全细胞纯化蛋白。为建立快速、敏感和特异的免疫学诊断奠定了基础。

恙虫病东方体Karp株， 56kD表膜蛋白，原核表达，酶联免疫吸附试验

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2006年12月01日

【期刊论文】一个广州管圆线虫特异性抗原候选基因的克隆与表达

詹希美，孟锦绣，程梅，李素丽，甘明，徐贵峰，李卓雅，何蔼

中国人兽共患病学报，2006，22（8）704～711，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的用免疫探针交叉筛选前期实验获得的广州管圆线虫候选抗原基因，将筛选出的特异抗原候选基因进行原核表达、鉴定。方法制备抗血吸虫和抗旋毛虫多克隆抗体血清，交叉筛选广州管圆线虫抗原候选基因，从中获得特异性抗原候选基因，将其从重组噬菌体状态转化为质粒状态，再亚克隆入原核表达载体pET230a2c（+）进行融合表达，SDS2PAGE鉴定表达产物，同时对该基因进行生物信息学分析。结果获得了一个广州管圆线虫特异性抗原候选基因，经生物信息学分析该抗原基因属中间纤维家族基因（intermediatefilament,IF），原核表达产物为48KDa。结论获得了一个广州管圆线虫特异性抗原候选基因及其原核表达产物。

广州管圆线虫，抗原，中间纤维， cDNA 文库

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2006年12月01日

【期刊论文】日本血吸虫核酸在宿主体内的代谢*

詹希美，洪佳冬，何蔼，王轶，屈良鹄

中国人兽共患病杂志，2002，18（1）59～61，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的为了解日本血吸虫核酸在宿主体内代谢规律，寻找快捷、简便的血吸虫病核酸诊断方法提供理论依据。方法本实验用经体外扩增的日本血吸虫rRNA大亚基核酸片段，以不同剂量20、40、60、80、100μg经小鼠尾静脉注入小鼠体内，在不同的时间5、10、20、30、60、120min取小鼠肝、全血及血清，用PCR方法检测血吸虫核酸片段在小鼠体内的分布及代谢。结果用特异的rRNA引物对日本血吸虫成虫基因组DNA进行扩增，可见一条分子量大小为270bp的扩增带。当注入小鼠体内核酸量大于80μg时，血清中5、10min组、肝内30、60min组检测出有血吸虫特异性的核酸片段；而20、120min肝及血清中均不能检测出血吸虫的特异性片段。白细胞在不同剂量及各个时间点上的PCR结果均为阴性。结论提示血吸虫核酸在小鼠体内的分布及代谢情况：血吸虫核酸进入小鼠体内，首先是分布在血清中，经血液循环后，核酸作为异源性物质，很快地在肝内进行代谢，经一段时间后用PCR方法也检测不到。

日本血吸虫，异源核酸，聚合酶链反应

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2006年12月01日

【期刊论文】日本血吸虫成虫低密度脂蛋白受体研究

詹希美，王亮*，李卓雅，王轶，何蔼，谢敏辉

中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2002，20（2）90～93，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的研究日本血吸虫成虫低密度脂蛋白受体，为以后的疫苗研究提供依据。方法自人工感染家兔的肠系膜下静脉取日本血吸虫成虫，用非离子去污剂TritonX2100抽提出日本血吸虫成虫表膜蛋白，反相高效液相色谱（HPLC）进行分离纯化后，收集各主要分离蛋白峰，以125I标记的人血浆低密度脂蛋白(LDL)作为放射性配体，经放射性自显影及放射性受体配体结合分析鉴定能与人血浆125I2LDL特异结合的蛋白。并以SDS2PAGE及等电聚焦电泳确定其纯度、分子量及等电点。结果在日本血吸虫雌、雄成虫虫体表膜均存在可与人血浆125I2LDL特异性结合的蛋白分子，此蛋白是日本血吸虫成虫低密度脂蛋白受体，在HPLC上保留时间为10.5min，SDS2PAGE显示其分子量约60～65kDa，等电点为6.7。结论日本血吸虫雌、雄成虫虫体表膜均存在人血浆低密度脂蛋白受体。

日本血吸虫，低密度脂蛋白受体，高效液相色谱(， HPLC)，，放射性受体配体结合分析

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