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2006年12月01日

詹希美，俞慕华，陈代雄，王轶，何蔼，梁　瑜，黎宝玲，潘恩信

中国人兽共患病杂志，2000，16（6）9～12，-0001，（）：

-1年11月30日

目的构建抗华支睾吸虫噬菌体抗体库,以期筛选出抗循环抗原的抗体组合。方法应用噬菌体表面呈现技术，从感染华支睾吸虫病人淋巴细胞中提取总RNA，逆转录成cDNA后，用相应引物PCR扩增出重链Fd和轻链基因，经XhoÉ和Spel、SacÉ和XbaÉ双酶切，先后克隆入噬粒载体pComb3，再电转化大肠杆菌XL12blue菌株，辅助噬菌体VCSM13超感染。结果从感染华支睾吸虫病人淋巴细胞中扩增出约700bp重链C1、C3Fd段和轻链J、K基因，分别和pComb3连接后成功导入XL12blue，得到滴度为715×1010cfuöml，库容量为516×106噬菌体抗体库。结论抗华支睾吸虫Fab段噬菌体抗体库的构建，为进一步筛选抗华支睾吸虫循环抗原单克隆抗体奠定了基础。

华支睾吸虫，噬菌体表面呈现，噬菌体抗体

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2006年11月16日

【期刊论文】弓形虫不同地理株致密颗粒蛋白基因的比较研究*

詹希美，郑斌，何蔼，易冰，李卓雅，郑焕钦，张瑞琳，詹希美*， *

中国人兽共患病杂志，2004，20（9）：769～789，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的比较弓形虫不同地理株（RH株、zS2株、GT株）GP-7基因的异同。方法从弓形虫不同地理株的基因组DNA中扩增出GRA7基因，对目的基因用限制性内切酶（Esp31、Cfrl、MboI）酶切并比较。结果PCR扩增出3株弓形虫的目的基因片段大小均在500bp-750bp之间，约711bp。三种限制性内切酶酶切片段的大小均与理论值相符。结论弓形虫不同地理株GRA7基因具有高度保守性。

弓形虫，致密颗粒蛋白7基因，限制性内切酶

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2006年11月16日

【期刊论文】刚地弓形虫RH株微线体蛋白MIC3成熟肽的克隆与表达*

詹希美，余南，何蔼，郑小英，申川军，郑斌，郑焕钦，李卓雅，曹爱莲

中国人兽共患病杂志，2005，21（4）：331～334，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的克隆编码刚地弓形虫（Toxoplasmagondii）RH株微线体蛋白MIC3成熟肽的基因，构建原核表达载体DET—MMIC3，并在大肠杆菌BL21株中表达。方法采用PCR技术从刚地弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码微线体蛋白MIC3成熟肽的基因，并克隆到T载体上，经测序鉴定后，将目的基因亚克隆到表达载体pEZ3Oa（+）上，构建质粒pETMMIC3。表达产物用Westemblot进行进一步确认。结果经初步菌液PCR鉴定，提取质粒双酶切鉴定并测序，确认插入T载体的序列为所需的目的序列;亚克隆构建pET-MMIC3，转化到宿主菌大肠杆菌BL21，得到分子量为37.2kDa的重组表达蛋白。westemblot的结果与预测相符。结论成功的克隆并融合表达了刚地弓形虫RH株微线体蛋白MIC3成熟肽，为进一步研究其在弓形虫粘附和入侵中的作用奠定了基础。

刚地弓形虫，微线体，克隆，表达

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2006年11月16日

【期刊论文】刚地弓形虫LDH-Like MDH cDNA的克隆和序列分析*

詹希美，申川军，何蔼，郑小英，余南，郑斌，郑焕钦，李卓雅，曹爱莲，詹希美**

中国人兽共患病杂志，2005，21（6）：461～466，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的获取弓形虫RH株速殖子苹果酸脱氢酶（MDH）的cDNA全长序列，并对推导翻译出的氨基酸（aa）序列进行分析。方法将NCBIGenBank中登录的弓形虫MDHEST序列进行比对、拼接和电子延伸，发现近5’末端的部分核酸序列缺失。基于分析，设计的上游、下游引物分别包含起始密码子ATG和终止密码子TGA（TGA-UGA），使经RT.PCR扩增出的片段对应完整的CDS或者ORF。之后对MDHCDS推导翻译出的aa序列进行了保守功能域和同源性分析。结果本研究克隆的MDH的cDNA全长951bp，推导翻译出的蛋白质有316个aa组成，约35kDa，与预期大小接近。保守功能域分析表明。弓形虫MDH最接近类一乳酸脱氢酶型（1actatedehydrogenase-like）MDH，其准确定名缩写为LDH-likeMDH，同时弓形虫MDH还具有其它脱氢酶类的特征。弓形虫MDH除与隐孢子虫和恶性疟原虫高度同源外，还与很多细菌等物种同源，但与人的同源性最低（22%）。弓形虫MDHcDNA序列在NCBIGenBank中登录号为AY650028，对应aa序列的登录号为AAT67462。结论本研究首次获得了弓形虫MDH基因的全长cDNA序列和对应的aa序列。MDH是三羧酸循环中的重要酶类。该酶活性的改变。将直接影响弓形虫的存活。弓形虫MDHaa序列与人MDH蛋白问的同源性很低，提示基于MDH蛋白作为药靶，经高通量技术筛选抗弓形虫药具有可行性。

弓形虫，苹果酸脱氢酶，克隆，序列分析

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2006年11月16日

【期刊论文】代表差异性分析方法分离日本血吸虫雌虫特异性序列

詹希美，王轶

中国人兽共患病杂志，2000，16（2）：72-73，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的分离日本血吸虫雌虫特异性序列，为研制抗生殖痘苗打下基础。方法应用代表差异性分析方法利用雄虫基因扣除雌虫基因，从而获得雌虫特异性序列，约562bp。结果谈序列为探针与，Solllllenl转印的酶切后的雌、雄虫基西组DNA及检测子和驱动于杂交，免疫学检测，显示只有检测于（tester）濂道有杂交区带，驱动于（dxiver）区带没有此带。结论初步说明所获序剐为雌虫特异性序列。

日本血吸虫， RDA， DNA杂交

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