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2006年11月16日

詹希美，郑斌，余南，李卓雅，郑焕钦，何蔼，詹希美*， *

中国人兽共患病杂志，2005，21（2）：119～121，-0001，（）：

-1年11月30日

目的将克隆入pGEX-4T-1的致密颗粒蛋白基因进行表达并对表达产物的免疫反应性进行评价。方法将重组表达质粒pGEX-4T-1/GRA7转入大肠埃希菌BL21，经IPTG诱导进行SDS变性蛋白质电泳，分别以Anti-GSTAn-tibodv、免抗弓形虫阳性血清和人抗弓形虫阳性血清为-抗进行WesternBlot分析。用GSTrapFFHiTrapaffinitycolumns纯化重组蛋白，以此蛋白作为包被抗原，BLISA法检测抗弓形虫阴性、阳性血清。结果SDS变性蛋白质电泳显示在43KDa66KDa蛋白条带之间有特异蛋白的表达，蛋白分子量大小与理论值相符。WesternBlot分析表明该重组蛋白为GST融合蛋白．且该蛋白能被人抗弓形虫阳性血清、免抗弓形虫阳性血清所识别。ELISA结果表明该蛋白能与人抗弓形虫阳性血清、免抗弓形虫阳性血清特异结合，而与抗弓形虫阴性血清无反应。结论弓形虫致密颗粒蛋白基因在大肠埃希菌中得到表达；该重组蛋白具有良好的免疫反应性。

刚地弓形虫，致密颗粒蛋白7，基因表达，免疫反应性，酶联免疫吸附试验

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2006年11月16日

【期刊论文】弓形虫不同地理株致密颗粒蛋白基因的比较研究*

詹希美，郑斌，何蔼，易冰，李卓雅，郑焕钦，张瑞琳，詹希美*， *

中国人兽共患病杂志，2004，20（9）：769～789，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的比较弓形虫不同地理株（RH株、zS2株、GT株）GP-7基因的异同。方法从弓形虫不同地理株的基因组DNA中扩增出GRA7基因，对目的基因用限制性内切酶（Esp31、Cfrl、MboI）酶切并比较。结果PCR扩增出3株弓形虫的目的基因片段大小均在500bp-750bp之间，约711bp。三种限制性内切酶酶切片段的大小均与理论值相符。结论弓形虫不同地理株GRA7基因具有高度保守性。

弓形虫，致密颗粒蛋白7基因，限制性内切酶

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2006年11月16日

【期刊论文】广州管圆线虫成虫eDNA文库构建*

詹希美，梁瑜，王轶，何蔼，李道宁，俞慕华，李卓雅，张瑞琳

中国人兽共患病杂志，2003，19（2）：34-37，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的构建广州管圆线虫成虫cDNA文库。方法提取广州管圆线虫成虫总RNA，用Clontech公司SMARTTMcDNA文库构建试剂盒反转录合成第一链cDNA，然后通过长距离PCR方法合成双链cDNA并扩增；PCR产物与kTripIEX2载体连接并包装，建成未扩增文库；检测未扩增文库滴度和重组效率后，进行文库扩增及测定扩增文库的滴度。结果经测定，未扩增文库滴度为9.7×10pfu/ml，重组效率达99.2%以上，文库扩增后滴度达9.13×10pfu/ml。结论已成功构建了广州管圆线虫成虫cDNA文库。

广州管圆线虫， cDNA文库，构建

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2006年11月16日

【期刊论文】广州管圆线虫成虫cDNA文库抗原基因的筛选*

詹希美，孟锦绣，李卓雅，吴长有，沈浩贤，梁瑜，张瑞琳，何蔼

中国人兽共患病杂志，2004，20（11）：934-937，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的从广州管圆线虫成虫cDNA文库中筛选特异性抗原基因。方法用大鼠感染血清做免疫探针，筛选广州管圆线虫成虫cDNA文库，对筛选得到的阳性克隆作交叉反应试验，PCR扩增外源基因插入片段并测序，用在线生物信息学软件进行同源性比对，推导氨基酸序列和蛋白质结构及进行功能分析。结果获得15个阳性克隆，分属三种基因，1个属中间纤维(IF)家族基因，3个与旋盘尾丝虫和秀丽杆线虫的真皮抗原同源，11个属主要精原蛋白(MSP)家族基因。其中1种基因表达产物没有发生明显交叉反应。结论从广州管圆线虫成虫cDNA文库中初步筛选出1个潜在特异性抗原基因和1个可能的主要抗原基因。

广州管圆线虫， cDNA文库，免疫筛选，抗原

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2006年11月16日

【期刊论文】广州管圆线虫Y-丁基甜菜碱羟化酶基因的获得与分析*

詹希美，孟锦绣，梁瑜，何蔼，李卓雅，雷智刚，易冰，张瑞琳

中国人兽共患病杂志，2004，20（3）：186-189，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的对广州管圆线虫成虫cDNA文库的插入片段进行研究。方法铺平板培养广州管圆线虫成虫cDNA文库，从中挑选生长、分离良好的噬菌斑进行PCR扩增，根据PCR产物电泳结果挑选较大的cDNA插入片段进行克隆、测序和原核诱导表达，对表达产物进行免疫学鉴定，用生物信息学方法分析其结构和功能。结果获得了国内外尚未见报道的广州管圆线虫全长基因，该基因长1416bp，编码由421个氨基酸组成的7-丁基甜菜碱羟化酶（gsmma-butyrobetaine,2-oxoglu-tarateclioxygenase。GAMMA-BBH,EC1.14,11.1)；免疫学鉴定结果显示GAMMA-BBH不能与大鼠的抗血清结合。结论首次获得广州管圆线虫成虫GAMMA～BBH表达基因，为广州管圆线虫的研究提供实验室依据。

广州管圆线虫， eDNA文库，克隆， 7-丁基甜菜碱羟化酶，生物信息学

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