中国科技论文在线

上传时间

2006年12月01日

詹希美，洪佳冬，何蔼，王轶，屈良鹄

中国人兽共患病杂志，2002，18（1）59～61，-0001，（）：

-1年11月30日

目的为了解日本血吸虫核酸在宿主体内代谢规律，寻找快捷、简便的血吸虫病核酸诊断方法提供理论依据。方法本实验用经体外扩增的日本血吸虫rRNA大亚基核酸片段，以不同剂量20、40、60、80、100μg经小鼠尾静脉注入小鼠体内，在不同的时间5、10、20、30、60、120min取小鼠肝、全血及血清，用PCR方法检测血吸虫核酸片段在小鼠体内的分布及代谢。结果用特异的rRNA引物对日本血吸虫成虫基因组DNA进行扩增，可见一条分子量大小为270bp的扩增带。当注入小鼠体内核酸量大于80μg时，血清中5、10min组、肝内30、60min组检测出有血吸虫特异性的核酸片段；而20、120min肝及血清中均不能检测出血吸虫的特异性片段。白细胞在不同剂量及各个时间点上的PCR结果均为阴性。结论提示血吸虫核酸在小鼠体内的分布及代谢情况：血吸虫核酸进入小鼠体内，首先是分布在血清中，经血液循环后，核酸作为异源性物质，很快地在肝内进行代谢，经一段时间后用PCR方法也检测不到。

日本血吸虫，异源核酸，聚合酶链反应

43浏览
0点赞
0收藏
0分享
150下载
0

引用

上传时间

2006年12月01日

【期刊论文】日本血吸虫成虫低密度脂蛋白受体研究

詹希美，王亮*，李卓雅，王轶，何蔼，谢敏辉

中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2002，20（2）90～93，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的研究日本血吸虫成虫低密度脂蛋白受体，为以后的疫苗研究提供依据。方法自人工感染家兔的肠系膜下静脉取日本血吸虫成虫，用非离子去污剂TritonX2100抽提出日本血吸虫成虫表膜蛋白，反相高效液相色谱（HPLC）进行分离纯化后，收集各主要分离蛋白峰，以125I标记的人血浆低密度脂蛋白(LDL)作为放射性配体，经放射性自显影及放射性受体配体结合分析鉴定能与人血浆125I2LDL特异结合的蛋白。并以SDS2PAGE及等电聚焦电泳确定其纯度、分子量及等电点。结果在日本血吸虫雌、雄成虫虫体表膜均存在可与人血浆125I2LDL特异性结合的蛋白分子，此蛋白是日本血吸虫成虫低密度脂蛋白受体，在HPLC上保留时间为10.5min，SDS2PAGE显示其分子量约60～65kDa，等电点为6.7。结论日本血吸虫雌、雄成虫虫体表膜均存在人血浆低密度脂蛋白受体。

日本血吸虫，低密度脂蛋白受体，高效液相色谱(， HPLC)，，放射性受体配体结合分析

64浏览
0点赞
0收藏
0分享
174下载
0

引用

上传时间

2006年11月16日

【期刊论文】抗日本血吸虫循环抗原单链抗体的抗原定位和初步应用*

詹希美，陈代雄，孟锦绣，易冰，何蔼，李卓雅，张瑞琳

中国人兽共患病杂志，2003，19（4）：63-65，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的将获得的抗日本血吸虫循环抗原的单链抗体进行抗原定位和用于诊断。方法用间接荧光抗体试验（IFA）对2株可溶性单链抗体所针对的抗原进行定位；将可溶性单链抗体进行生物素标记后，用于检测急、慢性血吸虫病人血清标本。结果两个特异性单链抗体分别于日本血吸虫成虫的肠管和生殖系统呈现明显的荧光反应。检测急性血吸虫病人血样20份，慢性血吸虫病人血样30份，正常人血样20份。结果用其中1株单链抗体检测急性病人的敏感度为60%，慢性病人的敏感度为36.7%，特异度为90%；以2株单链抗体混合检测急性病人的敏感度为75%，慢性病人的敏感度为56.7%，特异度为85%。结论经抗体库技术制备的单链抗体可用作日本血吸虫病的诊断，单抗组合较单株单抗可提高免疫学检测的敏感性。

日本血吸虫，循环抗原，单链抗体，抗原定位，检测

26浏览
0点赞
0收藏
0分享
56下载
0

引用

上传时间

2006年12月01日

【期刊论文】抗华支睾吸虫噬菌体抗体库的构建

詹希美，俞慕华，陈代雄，王轶，何蔼，梁　瑜，黎宝玲，潘恩信

中国人兽共患病杂志，2000，16（6）9～12，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的构建抗华支睾吸虫噬菌体抗体库,以期筛选出抗循环抗原的抗体组合。方法应用噬菌体表面呈现技术，从感染华支睾吸虫病人淋巴细胞中提取总RNA，逆转录成cDNA后，用相应引物PCR扩增出重链Fd和轻链基因，经XhoÉ和Spel、SacÉ和XbaÉ双酶切，先后克隆入噬粒载体pComb3，再电转化大肠杆菌XL12blue菌株，辅助噬菌体VCSM13超感染。结果从感染华支睾吸虫病人淋巴细胞中扩增出约700bp重链C1、C3Fd段和轻链J、K基因，分别和pComb3连接后成功导入XL12blue，得到滴度为715×1010cfuöml，库容量为516×106噬菌体抗体库。结论抗华支睾吸虫Fab段噬菌体抗体库的构建，为进一步筛选抗华支睾吸虫循环抗原单克隆抗体奠定了基础。

华支睾吸虫，噬菌体表面呈现，噬菌体抗体

53浏览
0点赞
0收藏
0分享
230下载
0

引用

上传时间

2006年11月16日

【期刊论文】恙虫病东方体Karp株56kD表膜蛋白基因的表达及免疫诊断应用研究*

詹希美，赖延东，郑小英，李秀英，何蔼，吴瑜，李卓雅

中国人兽共患病杂志，2004，20（10）：829-832，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的实现恙虫病东方体56kD表膜蛋白的原核表达并评价重组蛋白作为抗原的免疫诊断价值。方法亚克隆技术构建原核表达质粒载体pGEX-Sta56。转化宿主茵BL21（DE3），JPTG诱导表达GST-Sta56融合蛋白。亲和层析纯化融合蛋白，应用ELISA以评价其免疫诊断价值。结果pGEX-StY6经测序鉴定Sta56基因以正确的表达框架连入载体，经过诱导表达得到正确大小的融合蛋白，应用纯化的GST-Sta56的ELISA检测结果与全细胞抗原有很高线性相关性，在小鼠血清检测中敏感性，特异性和准确性分别大于90%，70%和80%。结论成功表达重组的56kD表膜蛋白并可能替代传统的全细胞纯化蛋白。为建立快速、敏感和特异的免疫学诊断奠定了基础。

恙虫病东方体Karp株， 56kD表膜蛋白，原核表达，酶联免疫吸附试验

21浏览
0点赞
0收藏
0分享
106下载
0

引用