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2006年11月16日

詹希美，孟锦绣，梁瑜，何蔼，李卓雅，雷智刚，易冰，张瑞琳

中国人兽共患病杂志，2004，20（3）：186-189，-0001，（）：

-1年11月30日

目的对广州管圆线虫成虫cDNA文库的插入片段进行研究。方法铺平板培养广州管圆线虫成虫cDNA文库，从中挑选生长、分离良好的噬菌斑进行PCR扩增，根据PCR产物电泳结果挑选较大的cDNA插入片段进行克隆、测序和原核诱导表达，对表达产物进行免疫学鉴定，用生物信息学方法分析其结构和功能。结果获得了国内外尚未见报道的广州管圆线虫全长基因，该基因长1416bp，编码由421个氨基酸组成的7-丁基甜菜碱羟化酶（gsmma-butyrobetaine,2-oxoglu-tarateclioxygenase。GAMMA-BBH,EC1.14,11.1)；免疫学鉴定结果显示GAMMA-BBH不能与大鼠的抗血清结合。结论首次获得广州管圆线虫成虫GAMMA～BBH表达基因，为广州管圆线虫的研究提供实验室依据。

广州管圆线虫， eDNA文库，克隆， 7-丁基甜菜碱羟化酶，生物信息学

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2006年11月16日

【期刊论文】弓形虫致密颗粒蛋白基因的表达及其重组蛋白免疫反应性的评价*

詹希美，郑斌，余南，李卓雅，郑焕钦，何蔼，詹希美*， *

中国人兽共患病杂志，2005，21（2）：119～121，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的将克隆入pGEX-4T-1的致密颗粒蛋白基因进行表达并对表达产物的免疫反应性进行评价。方法将重组表达质粒pGEX-4T-1/GRA7转入大肠埃希菌BL21，经IPTG诱导进行SDS变性蛋白质电泳，分别以Anti-GSTAn-tibodv、免抗弓形虫阳性血清和人抗弓形虫阳性血清为-抗进行WesternBlot分析。用GSTrapFFHiTrapaffinitycolumns纯化重组蛋白，以此蛋白作为包被抗原，BLISA法检测抗弓形虫阴性、阳性血清。结果SDS变性蛋白质电泳显示在43KDa66KDa蛋白条带之间有特异蛋白的表达，蛋白分子量大小与理论值相符。WesternBlot分析表明该重组蛋白为GST融合蛋白．且该蛋白能被人抗弓形虫阳性血清、免抗弓形虫阳性血清所识别。ELISA结果表明该蛋白能与人抗弓形虫阳性血清、免抗弓形虫阳性血清特异结合，而与抗弓形虫阴性血清无反应。结论弓形虫致密颗粒蛋白基因在大肠埃希菌中得到表达；该重组蛋白具有良好的免疫反应性。

刚地弓形虫，致密颗粒蛋白7，基因表达，免疫反应性，酶联免疫吸附试验

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2006年11月16日

【期刊论文】弓形虫不同地理株致密颗粒蛋白基因的比较研究*

詹希美，郑斌，何蔼，易冰，李卓雅，郑焕钦，张瑞琳，詹希美*， *

中国人兽共患病杂志，2004，20（9）：769～789，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的比较弓形虫不同地理株（RH株、zS2株、GT株）GP-7基因的异同。方法从弓形虫不同地理株的基因组DNA中扩增出GRA7基因，对目的基因用限制性内切酶（Esp31、Cfrl、MboI）酶切并比较。结果PCR扩增出3株弓形虫的目的基因片段大小均在500bp-750bp之间，约711bp。三种限制性内切酶酶切片段的大小均与理论值相符。结论弓形虫不同地理株GRA7基因具有高度保守性。

弓形虫，致密颗粒蛋白7基因，限制性内切酶

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2006年11月16日

【期刊论文】刚地弓形虫RH株微线体蛋白MIC3成熟肽的克隆与表达*

詹希美，余南，何蔼，郑小英，申川军，郑斌，郑焕钦，李卓雅，曹爱莲

中国人兽共患病杂志，2005，21（4）：331～334，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的克隆编码刚地弓形虫（Toxoplasmagondii）RH株微线体蛋白MIC3成熟肽的基因，构建原核表达载体DET—MMIC3，并在大肠杆菌BL21株中表达。方法采用PCR技术从刚地弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码微线体蛋白MIC3成熟肽的基因，并克隆到T载体上，经测序鉴定后，将目的基因亚克隆到表达载体pEZ3Oa（+）上，构建质粒pETMMIC3。表达产物用Westemblot进行进一步确认。结果经初步菌液PCR鉴定，提取质粒双酶切鉴定并测序，确认插入T载体的序列为所需的目的序列;亚克隆构建pET-MMIC3，转化到宿主菌大肠杆菌BL21，得到分子量为37.2kDa的重组表达蛋白。westemblot的结果与预测相符。结论成功的克隆并融合表达了刚地弓形虫RH株微线体蛋白MIC3成熟肽，为进一步研究其在弓形虫粘附和入侵中的作用奠定了基础。

刚地弓形虫，微线体，克隆，表达

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2006年11月16日

【期刊论文】刚地弓形虫LDH-Like MDH cDNA的克隆和序列分析*

詹希美，申川军，何蔼，郑小英，余南，郑斌，郑焕钦，李卓雅，曹爱莲，詹希美**

中国人兽共患病杂志，2005，21（6）：461～466，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的获取弓形虫RH株速殖子苹果酸脱氢酶（MDH）的cDNA全长序列，并对推导翻译出的氨基酸（aa）序列进行分析。方法将NCBIGenBank中登录的弓形虫MDHEST序列进行比对、拼接和电子延伸，发现近5’末端的部分核酸序列缺失。基于分析，设计的上游、下游引物分别包含起始密码子ATG和终止密码子TGA（TGA-UGA），使经RT.PCR扩增出的片段对应完整的CDS或者ORF。之后对MDHCDS推导翻译出的aa序列进行了保守功能域和同源性分析。结果本研究克隆的MDH的cDNA全长951bp，推导翻译出的蛋白质有316个aa组成，约35kDa，与预期大小接近。保守功能域分析表明。弓形虫MDH最接近类一乳酸脱氢酶型（1actatedehydrogenase-like）MDH，其准确定名缩写为LDH-likeMDH，同时弓形虫MDH还具有其它脱氢酶类的特征。弓形虫MDH除与隐孢子虫和恶性疟原虫高度同源外，还与很多细菌等物种同源，但与人的同源性最低（22%）。弓形虫MDHcDNA序列在NCBIGenBank中登录号为AY650028，对应aa序列的登录号为AAT67462。结论本研究首次获得了弓形虫MDH基因的全长cDNA序列和对应的aa序列。MDH是三羧酸循环中的重要酶类。该酶活性的改变。将直接影响弓形虫的存活。弓形虫MDHaa序列与人MDH蛋白问的同源性很低，提示基于MDH蛋白作为药靶，经高通量技术筛选抗弓形虫药具有可行性。

弓形虫，苹果酸脱氢酶，克隆，序列分析

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