目的：构建含有人血管内皮生长因子165基因的重组腺病毒载体，并观察其对C17.2神经干细胞体外增殖和分化的影响。方法：将血管内皮生长因子165基因克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV，经酶切线性化后，与腺病毒骨架质粒pAdEasy共同转染大肠杆菌BJ5183同源重组获得重组腺病毒质粒，将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞包装获得有感染能力但复制缺陷的重组腺病毒pAdCMV血管内皮生长因子165，转染体外培养的C17.2神经干细胞。以单纯携绿色荧光蛋白腺病毒转染为对照1组。通过酶联免疫吸附测定检测其在C17.2神经干细胞中不同时间段的表达。C17.2神经干细胞培养24h后，将pAdCMV GFP和pAdCMV血管内皮生长因子165转染C17.2神经干细胞（pAdCMV绿色荧光蛋白和pAsCMV血管内皮生长因子165转染组），24，48，72h后每孔加入四氮唑盐10μL，检测pAdCMV转染对C17.2神经干细胞增殖的影响。将未进行pAdCMV绿色荧光蛋白，pAdCMV血管内皮生长因子165转染C17.2神经干细胞设为对照2组。收集C17.2神经干细胞（C17.2神经干细胞组）和已经转染pAdCMV VEGF165的C17.2神经干细胞（pAdCMV血管内皮生长因子165的C17.2神经干细胞组），对两组细胞进行培养，将上术细胞爬片进行多聚醛固定，行巢蛋白和神经元特异性烯醇化酶免疫组化法检测。结果：①重组腺病毒AdCMV血管内皮生长因子165在293细胞中包装成功，病毒滴度达2×1011efu/L。酶联名疫吸附检测转染pAd血管内皮生长因子165的C17.2神经干细胞上清VEGF浓度显示转染后第3天为（710±82）ng/L,明显高于转染前（118±20）ng/L，第5天和第7天血管内皮生长因子165达分泌高峰，分别为（1110±126）ng/L，（1135±138）ng/L，此后渐下降，于第13天（355±35）ng/L仍显著高于对照1组（110±22）ng/L和转染前（t=5。87，P《0.01》。②C.2神经干细胞培养24，48，72h后对照2组干细胞增殖率分别为（0.1367±0.186）%，（0.3300±0.0134）%，（0.373±0.0136）%，pAdCMV绿色荧光蛋转染组C17.2神经干细胞24，48，72h后干细胞的增殖率分别为（0.635±0.0247）%。两个实验组神经干细胞增殖率与对照组1组比较，P>0.05。pAdCMV血管内皮生长因子165转染组（C17.2神经干细胞增殖率与pAdCMV绿色荧光蛋白转染组比较，P>0.05）。③C17.2神经干细胞组和pAdCMV血管内皮生长因子165转染C17.2神经干细胞组组的巢蛋白阳性细胞率分别为（15.7±1.003）%，（17.63±1.082）%，神经元特异性烯醇化酶阳性细胞率分别为（17.63±1.082）%，（21.49±1.022）%，两组比较无明显差异（p>0.05）。结论：成功构建pAdCMV血管内皮生长因子165重级腺病毒，获得了稳定表达血管内皮生长因子165的神经干细胞克隆，体外pAdCMV血管内皮生长因子165未对C17.2神经干细胞增殖和分化产生影响。

【目的】探讨Persephin对6-羟基多巴（6-OHDA）损伤神经干细胞的保护作用。【方法】用RT-RPR法从人胚胎脑获得Persephin Cdna，构建重组Persephin腺病毒。用Western blot方法分Persephin基因的表厉害。Hoechst染色和流式劝胞术测定6-羟基多巴对神经干细胞调亡的诱导作用。【结果】从人胎脑成功克隆了人Persephin Cdna，构建了其腺病毒载体。Western blot证实重组Persephin腺病毒在神经干细胞中的表达，表达的Persephin可抑制6-羟其多巴诱导的神经干细胞调亡。【结论】Persephin对6-羟其多巴诱导的神经干细胞且有保护作用

目的：构建人胰岛素样生长因子腺病毒表达载体，并观察其在C17.2神经干细胞的表达。方法：实验于2004-03/11在中山在学附属第二医院林百欣医学中心完成。将胰岛素样生长因子克隆往复制缺陷性腺病毒穿梭质粒得到含水量胰岛素样生长因子的腺病毒穿梭质粒，再与腺病骨架质一在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组得到含胰岛素样生长因子的整合质料，在HEK293A细胞中包装加膜，聚合酶链反应鉴定，大量扩增病毒。将含目的基因的病毒转染C17.2神经干细胞，原位杂交检测胰岛素样生长因子mRNA，蛋白印迹检测胰岛素样生长因子蛋白的表达，酶联名疫吸附实验检测胰岛素样生长因子蛋白的表达曲线。结果：经酶切鉴定及聚合酶链反应鉴定证实腺病毒载体构建正确。原位杂交检测到胰岛素样生长因子Mrna，蛋白印迹分析检测到胰岛素样生长因子蛋白在转染了重组腺病毒的C17.2神经干细胞内表达。酶联免疫吸附实验结果显示胰岛素样生长因子蛋白在病毒转染5～d达高峰，13d仍高于转染前。结论：成功构建了含胰岛素样生长因子的重组腺病毒载体，转染了该腺病毒C17.2神经干细胞可稳定表达胰岛素样生长因子。

背景：目前国内外关于放射性脑损伤动物模型的研究均处于探索中，尚未形成成熟的模型制作方法。目的：建立急性放射性脑损伤的鼠模型，为进一步研究放射性脑损伤正确有效的预防措施提供实验依据。设计：以实验动物为研究对象，随机对照观察研究。单位：一所大学医院动物实验室。材料：实验于2001-06/2002-08在中山大学附属第二医院实验室完成。SD大鼠60只，体质量（300±30）g，雌雄各半，空白对照组20只，实验组40只。方法：SD大鼠头部接受60Coγ射线照射，7Gy/次，1次/d，连续照射6d，总剂量42Gy。照射结束后每日观察大鼠摄食、饮水量及次数，自主活动情况，有无出现神经系统症状与体征，每周检查并记录大鼠头部照射区毛发与皮肤情况、体质量变化，照射结束后第3，7，14，30天断头取脑，行病理组织学检查。主要观察指标：①一般情况观察。②照射后脑组织病理改变。结果：照射第3天起即出现每日摄食、饮水量减少；照射第1，2天，自主活动较对照组增多，第3天起活动渐减少；无异常神经系统体征；随观察时间延长体质量增长较对照组慢，但差异无显著性意义；所有大鼠均于照射后约2周时出现照射野轻度脱毛；照射后出现脑组织神经元变性坏死。结论：该模型制作方法切实、可靠，较好地模拟放射性脑损伤的过程，可用于预防或减轻谢谢治疗对脑组织损伤的实验研究。

背景：帕金森病患者脑内黑质多巴胺能神经元变性异致芳香族氨基酸脱羧酸（aromatic L-amino acid decarboxylase, AADC）活性水平的降低及波动是产生帕金森患者临床症状和在L-dopa替代治疗时“症状波动”等不良反应出现的重要原因之一。目的：探讨AADC基因脑内移植对帕金森病的治疗作用及其在左旋多巴治疗过程中的地位，并控讨阳离子脂质体介导的基因治疗方法的有效性。设计：2×析因设计。地点和材料：中山在学附属第二医院林百欣医学研究中心，材料主要包括人嗜铬细胞瘤组织，Trlzol，真核表达载体质粒Pcdna3，阳离子脂质体，6-OHDA，阿补吗啡，AADC单克隆抗体，SD大鼠。干预：使用基因克隆、亚克隆技术构建Pcdna3-AADC真核表达框图体将帕金病模型的SD大鼠随机分为实验组与对照组，分别以Pcd-NA3-AADC重组体和Pcd-NA3空载体进行阳离子脂质体包裹后，注射浓度的L-dopa进行治疗。采用免疫组化方法确定AADC的表达。主要观察指标：①AADC基因脑内移植后两组大鼠的旋转行为。②采用一定浓度的L-dopa进行治疗对大鼠旋转行为的影响。结果：①阳离子脂质体包裹的Pcd-NA3-AADC重组体脑内注射扣，在3，7，14，21，38d时大鼠的旋转行为获得了一定的改善（p>0.05），分别改善了56.0%，62.6%，49.4%，36.3%，27.4%，以1周时最为明显，在第5周时，其旋转行为则于移植前无明显差异p>0.05）。②使用同等浓度的左旋多巴（L-dopa，10mg/kg体质量·d）冶疗后，在上述相同的时间点时，实验组较对照组明显改善模型大鼠的旋转行为（p>0.05），以1周时最为明显，其旋转行为改善达93.4%，在第5周时，两组间差异无显著意义（p>0.05）。③免疫组化方法确定AADC在纹状体区的稳定表达。结论：增加脑内AADC基因表达可有效改善帕金森病大鼠的旋转行为，并可增加L-dopa冶疗效果，有助在低剂量上长期维持L-dopa的疗效；阳离子脂质体介导师的裸基因脑内移植技术为基因治疗帕金森病提供一种手段。