目的：探讨鹿茸多肽(Velvet ander polypeptides-VAP)对胎鼠脑神经干细胞(Neural stem cell-NSC)体外分化的影响。方法：从El2-14天的Wistar大鼠脑中分离扩增获得大量NSC后，加入不同剂量的鹿茸多肽刺激NSC分化，以含有10％ 小牛血清DMEM／F12培养基组为对照组，实验组为加有5μg/L、lOμg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、400μg/L鹿茸多肽的10％小牛血清DMEM/F12培养基组。每组5个平皿。培养7天后进行抗NSE、GFAP免疫组化染色。每个平皿随机取两个视野(×100)，经图像分析系统计数每个视野中NSE及GFAP阳性细胞数(所选视野细胞从同一神经球中分化而来且生长均匀)，计算分化细胞总数及NSE阳性细胞占分化细胞总数的百分率，各组间差异用t检验。结果：对照组的NSC分化缓慢，细胞扁平，核不清晰，突起短而少，多聚集在神经球周围。5μg/L组与对照组相比未见明显差别；10μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、400μg/L组中细胞均分化较快，24小时后，神经球中即可见许多细胞伸出突起，胞体丰满，随着时间的延长，分化的细胞越来越多，到第7天细胞胞体饱满，轮廓清晰。有的细胞可见明显的鸟眼状细胞核且在胞质中可见清晰的颗粒；也有的细胞伸出树枝状突起，分化细胞的突起之间相互连成网络。其中以50μg/L组分化细胞生长最好，200μg/L、400μg/L组细胞分化率略有降低。细胞计数结果显示：5μg/L组与对照相比分化细胞总数及NSE阳性细胞率无显著性差异(P>0.05)；10μg/L、25μg/L、50μg/L、lO0μg/L、200μg/L、400μg/L组与对照组相比均有显著性差异(P<0.005；P<0.01)，lOμg/L组至50μg/L组分化细胞数呈明显上升趋势，50μg/L达到最多，从lO0μg/L组随浓度增加略有下降，但下降趋势平缓。结论：鹿茸多肽在一定浓度下可明显促进神经干细胞向神经元分化，并在这一范围内呈剂量依赖性。本实验为NSC体外定向诱导分化提供了依据。

背景：有证据表明羊膜上皮细胞能够表达神经系统细胞的几乎全部特异性抗原，且可以分泌多种神经营养因子及递质。若羊膜上皮细胞能够代替神经细胞，其神经营养作用必将为治疗神经推行性病变带来广阔前景。 目的：检测神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中是否表达？ 设计：重复测量设计。 单位：吉林大学第二临床医学院，吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室。 材料：实验于2004-10/2005-10在吉林大学基础学院组织与胚胎学教研室完成。选取清洁级孕12～14d的Wistar大鼠1只，将分离出的羊膜上皮细胞用于实验。小鼠抗大鼠神经元特异性抗原微管相关蛋白、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白、乙酰胆碱转移酶单克隆抗体、免抗大鼠神经元特异性烯醇化酶和NT-3多克隆抗体（武汉博士德公司）；大鼠抗大鼠Musashi抗体（日本庆应义塾大学岗野荣之教授惠赠）。 方法：取孕12～14d的Wistar大鼠胎盘，剥离羊膜获得上皮细胞，在37℃、体积分数为0.05的CO2环境下，胰蛋白酶消化5min，加入DMEM/F12培养液，以5×109L-1的浓度接种于培养瓶中。培养3d后，细胞以1×108L-1的浓度接种于预先涂有多聚赖氨酸的直径35mm平皿中，用质量浓度为40g/L的多聚甲醛固定20min。采用免疫细胞化学染色方法对神经元特异性抗原微管相关蛋白、神经元特异性烯醇化酶、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白、乙酰胆碱转移酶在羊膜上皮细胞中的表达情况进行检测。 主要观察指标：①大鼠羊膜上皮细胞不同培养时间的形态观察。②神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中的表达情况。 结果：①大鼠羊膜上皮细胞不同培养时间的形态观察：羊膜上皮细胞培养24h后，细胞扁平呈成纤维细胞样。3～5d后，胞体饱满，核大而圆，核仁清晰，突起发达，并互相连成网状。②神经组织细胞培养特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中的表达情况：培养4d后免疫细胞化学染色结果可见，羊膜上皮细胞表达Nestin、神经元特异性烯醇乙酶、乙酰胆碱转移酶以及Musashi、神经元特异性抗原微管相关蛋白、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白。 结论：羊膜上皮细胞与神经组织细胞具有一定的同源性，可望作为治疗神经系统疾病新的细胞来源。

目的：探讨TrkA受体在胚胎不同时期Wistar大鼠端脑内的表达情况。方法：成年Wistar大鼠合笼饲养，查到阴栓或阴道涂片查到精子为EO天，分别在El3、El5、E17、El9和E21天利用常规形态学手段免疫组织化学方法观察胚胎期Wistar大鼠不同脑区TrkA表达情况。结果：El3天胎脑组织内未检测到TrkA阳性表达，El5天TrkA表达阳性率在胚胎期大鼠端脑皮质内呈上升趋势，El7天达次高峰，El9开始下降，出生前E21天再次达表达高峰。胎鼠纹状体、海马的发育较晚，E17天开始发育，TrkA在其内的表达与皮质内相似。结论：TrkA在胎鼠端脑的表达始于El5天，且自E15～E21表达量呈持续增加趋势，符合胚胎诱导过程。

为了探讨神经生长因子（NGF）是否具有诱导神经干细胞（NSCs）向胆碱能神经元分化的能力，利用无血清培养技术从胎鼠脑内获得神经干细胞，传代纯化后利用免疫细胞化学技术，观察不同剂量NGF作用后神经干细胞向胆碱乙酰转移酶（ChAT）阳性细胞分化的情况。结果发现：50、100、200ng/m 1NGF组ChAT阳性细胞数明显比对照组增加，且以100ng/m组最为明显；各NGF组，分化的细胞状态较好，且突起明显比对照组增粗增长，以200ng/m组最为明显。此结果证明NGF具有诱导NSCs向胆碱能神经元分化的趋势，且能促进分化细胞突起的生长。

目的 探讨羊膜上皮细胞纹状内移植对帕金森病（PD）大鼠的治疗作用。方法 采用RT-PCR方法检测人羊膜上皮细胞株FL表达脑源性神经营养因子（BDNF）、神经营养因子-3（NT-3）mRNA；Hoechest33342标记后微移植方法将其移入PD大鼠模型纹状体内，免疫荧光技术检测移植细胞表达BDNF、NT-3状况。结果 羊膜上皮细胞能够表达BDNF、NT-3，植入纹状体内能够存活，并在第2周内明显改善PD大鼠的行为学症状。结论 羊膜上皮细胞可作为表达神经营养因子治疗PD的移植细胞。