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2005年03月08日
诸欣平， 徐旭娜， 诸欣平**， 杨雅平， 杨静， 张路平
中国寄生虫病防防治杂志，2003，2（16）：71～73，-0001，（）：
-1年11月30日
目的 在体外真核细胞COS7中表达重组质粒pcDNA3.1/Ts87，为旋毛虫病DNA疫苗的研究奠定基础。方法 将重组质粒pcDNA3.1/Ts87经脂质体L ipofectam ine介导，体外转染真核细胞COS7，通过细胞免疫组化，细胞裂解物的SDS-PAGE电泳和Western-blot分析检测表达产物。结果 重组质粒能够在COS7中表达出约38ku的目的蛋白，并能够被旋毛虫阳性血清特异识别。结论 构建的重组质粒可在体外真核细胞COS7 中成功表达。
旋毛虫， COS7细胞， 重组质粒， 真核表达
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2005年03月08日
【期刊论文】旋毛虫Ts87重组蛋白诱发小鼠保护性免疫的研究*
诸欣平， 丁利， 诸欣平**， 杨静， 王少华， 周蕾
寄生虫与医学昆虫学报，2003，4（10）：207～211，-0001，（）：
-1年11月30日
为了进一步探讨旋毛虫Ts87基因原核表达重组蛋白的保护性免疫作用，本试验用此纯化重组蛋白组分加福氏完全佐剂（FCA）皮下注射免疫NIH小鼠3次，继以旋毛虫感染性幼虫250条攻击，攻击后每周取血清测抗体IgG滴度，第35天计数小鼠肌肉幼虫数。结果显示重组蛋白免疫鼠的肌肉幼虫减虫率为42.3%， 血清抗Ts87重组蛋白体IgG的几何平均倒数滴度（GMRT）达到8000以上，均显著高于佐剂组和对照组。Ts87基因表达的重组蛋白可产生明显的保护性免疫作用。
旋毛虫 保护性免疫 重组蛋白 抗原
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2005年03月08日
【期刊论文】旋毛虫Ts87基因在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化*
诸欣平， 杨静， 诸欣平**， 杨雅平， 詹斌， 冯建军， Hotez Peter
中国人兽共患病杂志，2003，19（3）：25～40，-0001，（）：
-1年11月30日
目的 为进一步研究和应用旋毛虫Ts87基因，本文原核表达了PET-28a（+）/Ts87重组质粒，并纯化鉴定了该蛋白。方法 将Ts87基因片段克隆入原核表达载体PET-28a（+），形成重组质粒PET-28a（+）/Ts87，转化后经IPTG诱导得到表达蛋白（约40kDa），利用固定化金属离子（Ni2+）配体亲和层析纯化目的蛋白，进行复性，并用兔人工感染旋毛虫血清鉴定表达产物。结果 与结论成功构建了PET-28a（+）/Ts87，SDS-PAGE显示融合蛋白主要以包涵体形式存在，经过亲和层析得到纯化的目的蛋白，经鉴定可被人工感染旋毛虫兔血清识别。
旋毛虫， 融合蛋白， 纯化， 表达， 亲和层析
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2005年03月08日
诸欣平， 杨静， 诸欣平**， 杨雅平， 周蕾， PascalBoireau， 詹斌， 冯建军， Hotez Peter
中国寄生虫病防防治杂志，2003，1（16）：7～9，-0001，（）：
-1年11月30日
目的 获取旋毛虫抗原的cDNA克隆并进行蛋白的原核表达。方法 应用兔抗旋毛虫成虫可溶性全虫抗原血清对旋毛虫成虫cDNA文库进行筛选，并用兔人工感染旋毛虫血清对强阳性克隆进行再筛选。将编号为Ts87阳性克隆的基因片段亚克隆入PET228a（+）表达载体，IPTG诱导表达后用SDS2PAGE电泳分析表达产物。结果 免疫筛选获得阳性克隆Ts87；成功构建重组表达质粒PET228a（+）/Ts87。诱导表达该融合蛋白，SDS2PAGE电泳表明，其能表达一分子质量约为40ku的融合蛋白，与预测分子质量相符。结论 筛选到cDNA克隆Ts87，与兔抗旋毛虫成虫可溶性全虫抗原血清和兔人工感染旋毛虫血清均产生特异性免疫反应；PET原核表达系统所获重组蛋白为蛋白功能研究奠定了基础。
旋毛虫， 免疫筛选， cDNA克隆， 原核表达
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2005年03月08日
【期刊论文】抗旋毛虫成虫单克隆抗体的制备和保护性免疫的初步研究
诸欣平， 高欣， 黄敏君， 郭增柱， 周蕾， 姜洪杰
中华传染病杂志，2002，5（20）：297～300，-0001，（）：
-1年11月30日
目的 获得抗旋毛虫成虫的单克隆抗体（单抗）并初步研究其保护性免疫作用。方法 利用杂交瘤技术，用旋毛虫成虫抗原免疫的Balb/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合。用免疫双扩散鉴定单抗亚类，免疫印迹鉴定单抗的特异性。小鼠尾静脉接种单抗进行被动免疫保护实验。结果 建立了1株稳定分泌抗旋毛虫成虫单抗的细胞株。杂交瘤细胞培养上清液效价为1：6400，诱生腹水ELISA效价达1：204800。经鉴定单克隆抗体类型为IgM，可以识别旋毛虫成虫、肌幼虫及新生幼虫，相对分子质量约为40000蛋白，并且不与猪蛔虫、血吸虫、包虫、囊虫抗原发生交叉反应。单抗被动免疫后的减虫率为55.63%。结论 获得1株具种特异性、保护性的单克隆抗体，为筛选能诱导保护性免疫功能的旋毛虫抗原分子提供了有力的工具。
旋毛虫， 成虫， 抗体,， 单克隆
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