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2005年03月08日

诸欣平，杨静，诸欣平**，杨雅平，詹斌，冯建军， Hotez Peter

中国人兽共患病杂志，2003，19（3）：25～40，-0001，（）：

-1年11月30日

目的为进一步研究和应用旋毛虫Ts87基因，本文原核表达了PET-28a（+）/Ts87重组质粒，并纯化鉴定了该蛋白。方法将Ts87基因片段克隆入原核表达载体PET-28a（+），形成重组质粒PET-28a（+）/Ts87，转化后经IPTG诱导得到表达蛋白（约40kDa），利用固定化金属离子（Ni2+）配体亲和层析纯化目的蛋白，进行复性，并用兔人工感染旋毛虫血清鉴定表达产物。结果与结论成功构建了PET-28a（+）/Ts87，SDS-PAGE显示融合蛋白主要以包涵体形式存在，经过亲和层析得到纯化的目的蛋白，经鉴定可被人工感染旋毛虫兔血清识别。

旋毛虫，融合蛋白，纯化，表达，亲和层析

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2005年03月08日

【期刊论文】旋毛虫pcDNA3.1/Ts87重组质粒的构建和表达

诸欣平，杨雅平，诸欣平*，杨静，张路平，徐旭娜，黄松， Pascal BOireau

中国寄生虫学一寄生虫病杂志，2003，2（21）：93～95，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的构建和表达旋毛虫重组质粒。方法 PCR法在旋毛虫抗原基因，Ts87两端加上合适的酶切位点和KOZAK序列，与真核表达载体pcDNA3.1（+）连接，构建pcDNA3.1/Ts87重组质粒。采用Lip。fect锄ine介导的细胞外源DNA转染法，把重组质粒导人COs7细胞。分别用肌肉注射和基因枪免疫小鼠。结果和结论成功构建pcD-NA3.1/Ts87重组质粒，并在COs7细胞和BALB/c小鼠体内表达。

旋毛虫， DNA质粒，基因枪，构建，表达

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2005年03月08日

【期刊论文】免疫血清、巨噬细胞及补体对体外培养旋毛虫肌幼虫的杀伤作用★

诸欣平，王少华，诸欣平**，杨雅平，杨静，姜洪杰

寄生虫与医学昆虫学报，2003，1（10）：7～10，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

为进一步了解旋毛虫成虫抗原免疫血清在体外对旋毛虫肌幼虫的杀伤情况，采用体外培养方法进行了免疫血清、免疫血清与巨噬细胞、免疫血清与巨噬细胞及补体对旋毛虫肌幼虫的杀伤试验。结果显示：单纯免疫血清对体外培养的旋毛虫肌幼虫无明显杀伤作用，而免疫血清与巨噬细胞或免疫血清与巨噬细胞及补体联合对体外培养的旋毛虫肌幼虫均有杀伤作用，以免疫血清联合巨噬细胞及补体的作用最显著。

旋毛虫肌幼虫免疫血清巨噬细胞补体体外杀伤

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2005年03月08日

【期刊论文】免疫筛选旋毛虫cDNA克隆及原核表达★

诸欣平，杨静，诸欣平**，杨雅平，周蕾， PascalBoireau，詹斌，冯建军， Hotez Peter

中国寄生虫病防防治杂志，2003，1（16）：7～9，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的获取旋毛虫抗原的cDNA克隆并进行蛋白的原核表达。方法应用兔抗旋毛虫成虫可溶性全虫抗原血清对旋毛虫成虫cDNA文库进行筛选，并用兔人工感染旋毛虫血清对强阳性克隆进行再筛选。将编号为Ts87阳性克隆的基因片段亚克隆入PET228a（+）表达载体，IPTG诱导表达后用SDS2PAGE电泳分析表达产物。结果免疫筛选获得阳性克隆Ts87；成功构建重组表达质粒PET228a（+）/Ts87。诱导表达该融合蛋白，SDS2PAGE电泳表明，其能表达一分子质量约为40ku的融合蛋白，与预测分子质量相符。结论筛选到cDNA克隆Ts87，与兔抗旋毛虫成虫可溶性全虫抗原血清和兔人工感染旋毛虫血清均产生特异性免疫反应；PET原核表达系统所获重组蛋白为蛋白功能研究奠定了基础。

旋毛虫，免疫筛选， cDNA克隆，原核表达

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2005年03月08日

【期刊论文】抗旋毛虫成虫单克隆抗体的制备和保护性免疫的初步研究

诸欣平，高欣，黄敏君，郭增柱，周蕾，姜洪杰

中华传染病杂志，2002，5（20）：297～300，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的获得抗旋毛虫成虫的单克隆抗体（单抗）并初步研究其保护性免疫作用。方法利用杂交瘤技术，用旋毛虫成虫抗原免疫的Balb/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合。用免疫双扩散鉴定单抗亚类，免疫印迹鉴定单抗的特异性。小鼠尾静脉接种单抗进行被动免疫保护实验。结果建立了1株稳定分泌抗旋毛虫成虫单抗的细胞株。杂交瘤细胞培养上清液效价为1：6400，诱生腹水ELISA效价达1：204800。经鉴定单克隆抗体类型为IgM，可以识别旋毛虫成虫、肌幼虫及新生幼虫，相对分子质量约为40000蛋白，并且不与猪蛔虫、血吸虫、包虫、囊虫抗原发生交叉反应。单抗被动免疫后的减虫率为55.63%。结论获得1株具种特异性、保护性的单克隆抗体，为筛选能诱导保护性免疫功能的旋毛虫抗原分子提供了有力的工具。

旋毛虫，成虫，抗体,，单克隆

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