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2009年01月19日

毛忠贵，王春茹，王琮，段作营

中国油脂，2006，31（5）：055～058，-0001，（）：

-1年11月30日

以菜籽油、甘油为原料，采用无溶剂体系酶法甘油解生产1，3-甘油二酯（1，3-DAG）。研究结果表明，采用硅胶吸附甘油法可明显减少间歇反应中酶活损失，显著提高酶的生产能力和使用寿命。硅胶/甘油的比例不仅影响降低酶活损失的效果，而且与甘油解反应的初速度、转化率、产物组成密切相关。硅胶/甘油为1:1（W/W）时，间歇反应酶的生产能力可提高2.3倍，酶的重复使用次数可达20次。

1,， 3-DAG，甘油解，硅胶，吸附，甘油， Lipozyme RM IM

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2009年01月19日

【期刊论文】填充床反应器中酶法连续合成甘油二酯的研究

毛忠贵，孟祥河，孙培龙，杨开，何荣军，

生物工程学报，2005，21（3）：425～429，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

近年来，1，3-甘油二酯（DAG）由于其广泛用途及健康作用日益受到人们的重视。报道了一种无溶剂条件下填充床反应器中连续酶促合成1，3-DAG的方法。研究了填充柱的长径比、进料体积流速、温度、底物摩尔比对酯化率和1，3-DAG产量的影响。结果表明固定化酶填充柱长径比7.8，亚油酸、甘油摩尔比1:2，进料速度1.2mLPmin，65℃条件下酯化反应可实现脂肪酸酯化率、1，3-DAG纯度及生产效率的统一。填充床反应器中固定化酶连续催化酯化反应的一个主要问题即体系水分清除困难。实验研究了采用过量甘油吸附脱水的可行性，亚油酸、甘油摩尔比为1:2时，可明显改善固定化酶的稳定性，增加LipozymeRMIM的使用寿命。连续运行10d，残余酶活仍保持在80%以上，而对照组则仅为52%。

1,， 3-甘油二酯,，合成,， LipozymeRMIM,，填充柱反应器,，脱水

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2009年01月19日

【期刊论文】一株产海藻糖合成酶极地细菌的鉴定

毛忠贵，段作营*，徐骥，陈波，俞勇

工业微生物，2004，34（4）：019～022，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

从来源于极地的微生物中筛选得到一株产海藻糖合成酶的耐冷细菌S1，通过形态特征、培养特征、生理生化特征及16SrRNA基因序列分析,初步鉴定该菌为恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）。

海藻糖合成酶，菌种鉴定，恶臭假单胞菌

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2009年01月19日

【期刊论文】极端嗜热菌海栖热袍菌α-葡萄糖醛酸酶的高效表达和重组酶的纯化

毛忠贵，薛业敏， **，邵蔚蓝，

生物工程学报，2004，20（4）：554～560，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

α-葡萄糖醛酸酶作为木聚糖降解的限速酶之一，在木聚糖类半纤维素的生物转化中起着重要的作用。海栖热袍菌Thermotoga maritima是一个嗜极端高温的厌氧细菌，其产生的极耐热性酶类具有非常可观的工业应用前景。但热袍菌属Thermotoga的基因在大肠杆菌中的表达一般较困难。研究了T-maritima中的极耐热性α-葡萄糖醛酸酶基因在大肠杆菌不同菌株中的表达水平及纯化技术。结果表明，稀有密码子AGA、AGG和AUA限制了该基因在大肠杆菌中的表达，在大肠杆菌BL21-CodonPlus（DE3）-RIL可得到高效表达，重组蛋白表达量达20%，比酶活比野生菌株提高5倍；重组蛋白经热处理和金属Ni2+的亲和层析提纯后，达到了电泳纯，提纯倍数为5.1倍，收率为55.1%。对重组菌诱导表达条件的研究表明，营养丰富的TB培养基有助于重组菌的生长，重组菌生长至OD600为0.7～0.8时添加IPTG诱导5h后重组蛋白的表达量最高。

海栖热袍菌,， α-葡萄糖醛酸酶,，高效表达,，重组酶纯化,，酶学性质

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2009年01月19日

【期刊论文】极耐热性阿拉伯糖苷酶基因的表达、纯化及酶学性质研究

毛忠贵，薛业敏，邵蔚蓝*

微生物学报，2004，44（2）：220～225，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

采用PCR从海栖热袍菌（Thermotoga maritima）克隆出编码极耐热稳定性阿拉伯糖苷酶基因，以pET-20b为表达质粒，与其C 末端6个组氨酸标签序列融合，在大肠杆菌中得到高效表达。基因表达产物通过热处理和亲和层析柱纯化后，酶纯度达电泳均一。纯化重组酶稳定性检测表明，阿拉伯糖苷酶活性最适作用温度和最适作用pH分别为90～95℃和pH5.0～5.5，在pH4.2～8.2之间酶活力稳定，95℃的半衰期为4h；SDS2PAGE测得酶的分子量为56.57kD，与理论推算值相吻合。在所测定的底物中，阿拉伯糖苷酶仅对对硝基苯-阿拉伯呋喃糖苷（pNPAF）有专一性水解作用，其动力学参数Km值为0.18mmolPL，Vmax为139μmolPmin•mg。

阿拉伯糖苷酶,，基因表达,，重组酶纯化,，酶学性质

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