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张书霞, 华荣虹, 鲍恩东
南京农业大学学报,2003,26(1):66~69,-0001,():
-1年11月30日
18只AA肉鸡于22℃饲养。30日龄时,随机分成3组,分别进行0,5和10h的41℃高温应激处理。用流式细胞仪检测胸腺细胞DNA含量、细胞凋亡率以及细胞caspase-3和Bcl-2的表达。结果:应激处理O,5和10h时,(1)DNA合成期(S期)细胞比例分别是2.77%,3.28%和2.31%;(2)胸腺细胞凋亡率分别是3.99%,11.15%和3.31%:(3)caspase-3表达阳性细胞率分别为14.24%,27.01%和10.84%,Bcl-2表达阳性细胞率分别是20.59%,15.13%和27.92%;(4)应激5h与0和10h的细胞凋亡率、caspase-3和Bcl-2的阳性细胞表达率均有显著差异(P<0.05);(5)应激处理鸡的胸腺细胞凋亡率、caspase-3表达阳性细胞率从0h到5h逐渐升高,以后又逐渐下降。在高温应激过程中,胸腺细胞凋亡率与caspase-3表达阳性细胞率呈平行的变化关系,而与Bcl-2表达阳性细胞率呈反向变化关系。这些结果均说明:高温应激能明显影响胸腺细胞凋亡,而这种细胞凋亡的变化受caspase-3和Bcl-2表达的调节。
鸡, 胸腺, 细胞凋亡, 半胱天冬酶, Bcl-2蛋白
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【期刊论文】检测987p+肠毒素性大肠埃希氏菌PCR方法的建立
张书霞, 华荣虹, 何孔旺, 倪艳秀, 杨宗照
中国兽医科技,2002,32(1):3~5,-0001,():
-1年11月30日
以987p菌毛结构基因保守序列为靶序列,设计舍成了1对可扩增459bp目的片段的引物,建立了检测肠毒索性大肠埃希氏菌987p茵毛基因的PCR方法。该方法对K88+(+为菌毛阳性)、K99+、F41+参考菌株和链球菌、葡萄球菌、己氏杆菌的检测结果均为阴性;该方法的敏感度可达102CFU,对20株腹泻仟猪粪便分离物进行检测,有1株为阳性与血清学检测的结果一致。结果表明,此方法特异性和敏感性都很高,可用于临床987P肠毒素性大肠埃希氏茵病的快速诊断和流行病学调查。
肠毒素性大肠块埃希氏酋, 茸毛基因, PCR
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【期刊论文】鸡bcl-2表达质粒的构建及其对转染细胞凋亡的影响
张书霞, 步志高, 陈万芳
中国农业科学,13(6):88~94,-0001,():
-1年11月30日
构建了CMV驱动及牛生长激素polyA加尾信号修饰的bcl-2cDNA真核表达质粒pCDCB1。随后,采用脂质体转染方法,将扩增并纯化的pCDCB1转染至培养的SPF鸡胚次代单层成纤维细胞(CEF)内,96h后收集全部贴壁及上清脱落细胞,用Dotblot检测bcl-2的表达,用流式细胞术测定其细胞凋亡率。结果,pCDCB1转染后96h,bcl-2在CEF中呈高度表达;CEF平均凋亡率为1.14%,明显低于转染空白载体质粒的对照组7.64%的凋亡率,DNA合成期(S期)细胞为21.58%,也低于对照组。结果证实鸡bcl-2的表达可显著抑制体外培养CEF,亡进程,其效应与细胞DNA合成和增殖无关。
bcl 2, cDNA, 真核表达质粒, 转染, 细胞凋亡
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【期刊论文】bcl-2基因在成年和胚胎鸡免疫器官中的表达及其与细胞凋亡的关系*
张书霞, 陈万芳, 于勇, 鲍恩东
南京农业大学学报,1999,22(4):65~68,-0001,():
-1年11月30日
用一步法从17日龄来克亨SPF鸡胚和90日龄成年鸡的法氏囊、脾脏和胸腺组织中提取总RNA(TRNA),用鸡B-细胞淋巴瘤/白血病-2基因(bcl-2)cDNA探针进行Northernblot杂交。发现bcl-2在成年和胚胎鸡的不同免疫器官中表达量不同,成年鸡bcl-2的表达量多少依次为胸腺、脾脏、法氏囊,而胚胎鸡则是胸腺、法氏囊、脾脏。同时用流式细胞法测定这些器官的细胞凋亡情况,胚胎鸡法氏囊、脾脏和胸腺的细胞凋亡率分别是0.40%,0.68%和0.38%;成年鸡则是6.98%,1.17%和0.61%。结果表明,鸡bcl-2基因通过阻抑细胞凋亡直接调控正常免疫器官的发育,在淋巴细胞发育过程中bcl-2是免疫细胞亚型选择的重要调节物。
bcl-2, 鸡, 免疫器官, 表达, 细胞凋亡
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张书霞, 陈万芳
畜牧兽医学报,32(1):58~63,-0001,():
-1年11月30日
用来克亨SPF鸡复制马立氏病(Marek'sdisease,MD)肿瘤模型,取肿瘤和相应正常组织,液氮保存。AGPC(AcldGuanidiniumThiocvanate-Phenol-Chloroform)法提取组织总RNA(TR-NA),紫外测定其浓度,甲醛变性胶电泳观察其纯度。将一个含鸡bcl-21.2kb片段的质粒(PTTCB1),经转化扩增,提取质粒DNA,限制性内切酶(RE)消化,回收纯化bcl-2片段,放射性α-32P标记,制成探针。通过Nothern分子杂交检测MD肿瘤组织中bcl-2的表达,并与相应的正常组织比较。结果:鸡MD肿瘤组织和相应正常组织中均有bcl-2的表达;MD肿瘤组织中bcl-2的表达显著高于相应的正常组织。结合已进行的凋亡研究表明,bcl-2表达产物通过阻遏细胞凋亡促进MD淋巴瘤的形成。
bcl-2基因, 马立克氏病, 肿瘤, 表达
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