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肖敏

先后研究白酒固态发酵优良菌株及应用、异淀粉酶产生菌及应用、半乳糖苷酶及其基因以及酶法转糖基合成低聚糖、光合细菌分子生物学及其应用、烟草微生物及其作用。

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姓名：肖敏
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学位：
学术头衔：

博士生导师
职称：-
学科领域：

微生物学
研究兴趣：先后研究白酒固态发酵优良菌株及应用、异淀粉酶产生菌及应用、半乳糖苷酶及其基因以及酶法转糖基合成低聚糖、光合细菌分子生物学及其应用、烟草微生物及其作用。

个人简介

　肖敏，女，1962年11月生，理学博士，教授，2002年12月任博导。1985-1988年，山东大学微生物系获理学学士和理学硕士；2000年，山东大学微生物系获理学博士；1997-1998年，日本京都大学农学部应用分子微生物学研究室访问学者，研究双歧杆菌糖苷酶及其基因；2003年美国Wayne State University访问学者，研究糖基化合物的酶法合成。1996-2001年山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室副教授；2001年至今，山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室教授。先后主讲细菌分类学实验、细菌分类学、中国传统发酵、微生物生态学、微生物学实验、微生物学。先后研究白酒固态发酵优良菌株及应用、异淀粉酶产生菌及应用、半乳糖苷酶及其基因以及酶法转糖基合成低聚糖、光合细菌分子生物学及其应用、烟草微生物及其作用。近5年主持国家自然科学基金项目1项，国家"十五"科技攻关项目1项，省部级及其他项目5项。目前主要研究方向为应用微生物学、生物催化与低聚糖合成。曾获国家教委科技成果三等奖（1991年），山东省科学技术进步奖二等奖（1992年），河南省科学技术进步奖三等奖（1996年）。

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2009-02-20

【期刊论文】短双歧杆菌α-D-半乳糖苷酶Agal在大肠杆菌中的高效表达

肖敏，陆宇，赵晗，王勤鹏，陈忠民，钱新民

，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

短双歧杆菌（Bifidobacterium breve 203）α-D-半乳糖苷酶基因（agal）被克隆到大肠杆菌温度诱导表达质粒pBV220中，构建重组质粒pBV-agal，转入到大肠杆菌中进行温度诱导表达，得到重组酶Agal在大肠杆菌D115a、DH10B和BL21中的比活分别为28.08units/mg、19.44 units/mg和13.85 uni ts/mg。重组质粒pBV-agal在E.coliBL21中稳定性较好。纯化后的重组酶蛋白亚基分子量约为67 KDa，最适反应温度为40～45℃，酶在40℃以下稳定，60℃仅剩余5%的酶活性，70℃时失去所有的酶活性：最适反应pH为4.0～4.4，酶在pH 3.6～6.0范围内稳定。酶对p-硝基苯酚α-Q-半乳糖苷的（K=1.43retool/L，Vmax=35.71μmoll/（L•min）；对蜜二糖的Ko=261mmol几，Vmax=63.69μmol/（L•min）。结果说明本研究中的Agal与已经报道的短双歧杆菌的α-D-半乳糖苷酶有较大差异，是一种存在于同一菌体中新发现的α-D-半乳糖苷酶。

双歧杆菌， α-D-半乳糖苷酶，温度诱导，表达

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2009-02-20

【期刊论文】光合细菌中番茄红素的研究

肖敏，钱卫，王肇颖，韩波，杜桂彩，李永贵

山东大学学报（理学版），2004，6（3）：111～115，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

番茄红素是一种具有多种生理功能的类胡萝卜素，通常从番茄的果实中提取，价格昂贵。一些光合细菌也可以产番茄红素，从而使得利用微生物发酵法生产低成本番茄红素成为可能。本文通过正交实验等方法研究了1株紫色非硫细菌7-1的生长及产番茄红素的最佳培养条件在以0.4%的乳酸钠为碳源，0.05%的谷氨酰胺为氮源，Mg2+10ppm，并添加0.1%的酵母粉作为生长因子的改良RcvBN培养基中，7-1茵发酵液在72h内茵浓度可达5.08×1010个/mL，紫外吸收光谱表明细胞内番茄红素的含量明显提高，高效液相色谱法测定出细胞内番茄红素的含量为398.7 mg/100g茵体干重。

番茄红素，光合细菌，培养条件，高效液相色谱

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2009-02-20

【期刊论文】Reassembled Biosynthetic Pathway for a Large-scale Synthesis of CMP-Neu5Ac

肖敏， Jing Song， Hesheng Zhang， Bingyuan Wu， Yingxin Zhang， Hanfen Li， Min Xiao and Peng George Wang， *

Mar. Drugs 2003, 1, 34-45，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

CMP-Neu5Ac is an important sugar nucleotide for biosynthesis of sialic acid and its conjugates. In this paper, a large-scale production system of CMP-Neu5Ac by a single strain is reported. The co-expression of Neu5Ac aldolase (EC4.1.3.3) and CMPNeu5Ac synthetase (EC 2.7.7.43) was achieved by constructing individual genes into one plasmid and having a single culture that has both NeuAc aldolase and CMP-Neu5Ac synthetase activities. Overall this system only employed N-acetylmannosamine, excess of pyruvate and CTP to produce CMP-Neu5Ac. This work has demonstrated that a largescale synthesis of sialic acid-derived oligosaccharides could be achieved economically and efficiently through a single, biosynthetic pathway engineered microorganism.

biosynthesis， cytidine β-monophospho-N-acetylneuraminic acid， NeuAc aldolase， CMP-NeuAc synthetase

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2009-02-20

【期刊论文】一株曲霉 (Aspergillus sp1 AF)β-半乳糖苷酶的转糖基活性研究

肖敏，袁绍鹏，肖，敏，孙正，钱新民

食品与发酵工业，（11）：31～34，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

确定了1株曲霉的β-半乳糖苷酶产酶培养基的氮源为蛋白胨1%、酵母膏0.3%、KNO3 0.2%，碳源为葡萄糖1%，培养条件为30℃摇床培养48h。碳源实验证明，β-半乳糖苷酶在该菌株中属组成型表达。研究了该菌株的β-半乳糖苷酶转糖基反应体系中的pH、乳糖浓度、反应温度、反应时间对转糖基作用的影响，并利用薄层层析、高效液相层析技术分析了转糖基反应的产物。

β-半乳糖苷酶，转糖基作用，低聚半乳糖

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2009-02-20

【期刊论文】发酵木霉营养条件研究

肖敏，陈建爱，，陈为京

，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

实验表明，不同碳氮比、碳源、氮源、微量元素量，均影响木霉的生长和产孢，木霉的培养最佳营养条件是碳氮比为24∶1，碳源为淀粉，氮源为天门冬酰胺，Fe元素含量为5mg/L，K、P、s为完全培养基含量，Mg元素含量尽可能少，加入少量维生素也促进木霉的生长，提高木霉的产孢量。

木霉，营养条件，孢子

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2009-02-20

【期刊论文】木霉诱变菌株发酵条件研究

肖敏，陈建爱，，王未名，陈为京，孙永堂

核农学报，2002，16（5）：305～309，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

本文以木霉诱变菌株T5、T0803、T1010、T1003为实验对象，利用正交实验优化组合其生长的环境条件，方差分析表明各处理间差异显著，每个因素的设计差异都显著。最佳组合是菌株T1010，培养菌丝最适温度30℃，pH值6，高温培养3d 转入低温20℃培养，农药组合为代森锰。T1010液体振荡培养，在正常的生长范围内氧气对生长量的影响不大。

木霉，发酵条件

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2009-02-20

【期刊论文】沼泽红假单胞菌GroE基因高保守区DNA片段的克隆, 测序和特性分析

肖敏，朱崇日，钱新民，郑平

山东大学学报（理学版），2002， 8（4）：1～5，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

利用原核微生物GroE 基因特定区域高保守性设计了简并引物，以Rhodopseudomonas palustris Y6 的染色体为模板进行PCR 扩增，得到片段594bp 的产物. 将该DNA 片段连接到pUC-T 载体多克隆位点上，转化大肠杆菌DH5α菌株，得到阳性重组子。经Southern 杂交验证，已克隆的594bpDNA 片段来自Rhodopseudomonas palustris。测序结果分析表明该片段是细菌groE 基因高保守区。

Rhodopseudomonas palustris， groE 基因高保守区，克隆，序列分析

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2009-02-20

【期刊论文】人乳低聚糖的生物学功能

肖敏，吕玉泉，王鹏，曲音波

食品科学， 2002（9）：144～147，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

人乳低聚糖是一类存在于人乳中的天然低聚糖。它不仅具有抵御肠道病原微生物感染，而且还有维持肠道生态平衡的双重作用。其它许多生物学功能正在研究中。在人类与病原菌的抗争中，人乳低聚糖的开发和应用给了我们一个新的理念，并提供了一条有效的途径。

人乳低聚糖，生物学功能

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2009-02-20

【期刊论文】大肠杆菌棉子糖操纵子

肖敏，刘树峰，朱崇日，钱新民

《生物工程进展》， 2001（3）：50～53，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

大肠杆菌（Escherichia coli）棉子糖（raf）操纵子位于质粒，它编码能够使大肠杆菌吸收和利用三糖棉子糖的蛋白，即一个主动运输系统（Raf 透性酶），α-半乳糖苷酶和蔗糖水解酶。raf操纵子包括启动子rafP，调节基因rafR，操纵基因rafO以及rafA，rafB，rafD 三个结构基因。这个操纵子由一个阻遏蛋白RafR 负控制，同时以环腺苷2代谢降解物基因激活蛋白（cAMP2CAP）为中介的正调控也参与调节。

棉子糖操纵子，结构，功能，调控

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2009-02-20

【期刊论文】短双歧杆菌α-D-半乳糖苷酶的纯化及性质

肖敏，刘树峰，朱崇日，钱新民

中华微生物学和免疫学杂志，2001，5（3）：307～311，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

目的　研究短双歧杆菌（Bifidobacterium breve） α-D-半乳糖苷酶的纯化及性质。方法　采用硫酸铵分级沉淀及柱层析法纯化酶蛋白，垂直板状SDS2PAGE 和native gradient PAGE 检查蛋白纯度。结果　native gradient PAGE 电泳后活性染色确定无细胞粗酶液中含有一种α-D-半乳糖苷酶，纯化后的酶蛋白是一个相对分子质量（Mr）约为156×103 的双亚基蛋白质，等电点pH为5.3，最适反应温度为37℃，在40℃以下稳定，70℃时失去所有的酶活性。最适反应pH 为5.5～6.5，酶在pH5.5～9.5 范围内稳定。Hg+、Cu2 +、Ag+ （各1mmol/L）和PCMB （0.01mmol/L）强烈抑制酶活性，Co2 +、Mg2 +、Ca2 +、Mn2 +、Zn2 + （各1mmol/L）、EDTA 和DTT（0.01mmol/L）对酶活性没有抑制。酶专一性水解α-D-半乳糖苷键。酶对p2硝基苯酚2α-D-半乳糖苷、m2硝基苯酚2α-D-半乳糖苷和o2硝基苯酚2α-D-半乳糖苷的Km分别为0.168mmol/L、1.07mmol/L 和0.456mmol/L， Vmax 分别为4.55μmol/ min、0.378μmol/ min 和0.614μmol/ min。结论　B. breve 的α-D-半乳糖苷酶与少数国外报道的其他双歧杆菌的α-D-半乳糖苷酶有相似之处，也有不同点。其Mr 不同，在60℃之内的热稳定性明显较好。

双歧杆菌， α-D-半乳糖苷酶，纯化

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【期刊论文】光合细菌中番茄红素的研究

肖敏，钱卫，王肇颖，韩波，杜桂彩，李永贵

山东大学学报（理学版），2004，6（3）：111～115，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

番茄红素，光合细菌，培养条件，高效液相色谱

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【期刊论文】人乳低聚糖的生物学功能

肖敏，吕玉泉，王鹏，曲音波

食品科学， 2002（9）：144～147，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

人乳低聚糖，生物学功能

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【期刊论文】一株曲霉 (Aspergillus sp1 AF)β-半乳糖苷酶的转糖基活性研究

肖敏，袁绍鹏，肖，敏，孙正，钱新民

食品与发酵工业，（11）：31～34，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

β-半乳糖苷酶，转糖基作用，低聚半乳糖

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2009-02-20

【期刊论文】Reassembled Biosynthetic Pathway for a Large-scale Synthesis of CMP-Neu5Ac

肖敏， Jing Song， Hesheng Zhang， Bingyuan Wu， Yingxin Zhang， Hanfen Li， Min Xiao and Peng George Wang， *

Mar. Drugs 2003, 1, 34-45，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

biosynthesis， cytidine β-monophospho-N-acetylneuraminic acid， NeuAc aldolase， CMP-NeuAc synthetase

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【期刊论文】大肠杆菌棉子糖操纵子

肖敏，刘树峰，朱崇日，钱新民

《生物工程进展》， 2001（3）：50～53，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

棉子糖操纵子，结构，功能，调控

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【期刊论文】短双歧杆菌α-D-半乳糖苷酶Agal在大肠杆菌中的高效表达

肖敏，陆宇，赵晗，王勤鹏，陈忠民，钱新民

，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

双歧杆菌， α-D-半乳糖苷酶，温度诱导，表达

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【期刊论文】沼泽红假单胞菌GroE基因高保守区DNA片段的克隆, 测序和特性分析

肖敏，朱崇日，钱新民，郑平

山东大学学报（理学版），2002， 8（4）：1～5，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

Rhodopseudomonas palustris， groE 基因高保守区，克隆，序列分析

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2009-02-20

【期刊论文】木霉诱变菌株发酵条件研究

肖敏，陈建爱，，王未名，陈为京，孙永堂

核农学报，2002，16（5）：305～309，-0001，（）：

-1年11月30日

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木霉，发酵条件

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2009-02-20

【期刊论文】High-yield production and characterization of α-galactosidase fromBifidobacterium breve grown on raffinose

肖敏， M. Xiao，， K. Tanaka， X.M. Qian， K. Yamamoto & H. Kumagai， *

，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

Bifidobacteria assimilated raffinose about 4-fold more effectively than other intestinal bacteria, and-galactosidase was active in all strains of Bifidobacteria tested. The enzyme activity of Bifidobacterium breve grown on raffinose was highly and specifically increased. Its activity was 30-fold higher than that of B. breve grown on glucose. Melibiose was also effective for production of the enzyme. The enzyme was purified to homogeneity from B. breve. It is a homodimer with Mr of about 160 kDa, and its optimum pH for activity of 5.5-6.5. The enzyme showed strict substrate specificity for α-galactoside although it had slight activity for α-glucoside. It hydrolysed stachyose, melibiose (Km=2mM) and raffinose (Km=0.7mM).

Bifidobacteria， α-galactosidase， high-yield production， melibiose， raffinose

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【期刊论文】发酵木霉营养条件研究

肖敏，陈建爱，，陈为京

，-0001，（）：

-1年11月30日

摘要

木霉，营养条件，孢子

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