肖敏
先后研究白酒固态发酵优良菌株及应用、异淀粉酶产生菌及应用、半乳糖苷酶及其基因以及酶法转糖基合成低聚糖、光合细菌分子生物学及其应用、烟草微生物及其作用。
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- 姓名:肖敏
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学术头衔:
博士生导师
- 职称:-
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学科领域:
微生物学
- 研究兴趣:先后研究白酒固态发酵优良菌株及应用、异淀粉酶产生菌及应用、半乳糖苷酶及其基因以及酶法转糖基合成低聚糖、光合细菌分子生物学及其应用、烟草微生物及其作用。
肖敏,女,1962年11月生,理学博士,教授,2002年12月任博导。1985-1988年,山东大学微生物系获理学学士和理学硕士;2000年,山东大学微生物系获理学博士;1997-1998年,日本京都大学农学部应用分子微生物学研究室访问学者,研究双歧杆菌糖苷酶及其基因;2003年美国Wayne State University访问学者,研究糖基化合物的酶法合成。1996-2001年山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室副教授;2001年至今,山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室教授。先后主讲细菌分类学实验、细菌分类学、中国传统发酵、微生物生态学、微生物学实验、微生物学。先后研究白酒固态发酵优良菌株及应用、异淀粉酶产生菌及应用、半乳糖苷酶及其基因以及酶法转糖基合成低聚糖、光合细菌分子生物学及其应用、烟草微生物及其作用。近5年主持国家自然科学基金项目1项,国家"十五"科技攻关项目1项,省部级及其他项目5项。目前主要研究方向为应用微生物学、生物催化与低聚糖合成。曾获国家教委科技成果三等奖(1991年),山东省科学技术进步奖二等奖(1992年),河南省科学技术进步奖三等奖(1996年)。
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【期刊论文】短双歧杆菌α-D-半乳糖苷酶Agal在大肠杆菌中的高效表达
肖敏, 陆宇, 赵晗, 王勤鹏, 陈忠民, 钱新民
,-0001,():
-1年11月30日
短双歧杆菌(Bifidobacterium breve 203)α-D-半乳糖苷酶基因(agal)被克隆到大肠杆菌温度诱导表达质粒pBV220中,构建重组质粒pBV-agal,转入到大肠杆菌中进行温度诱导表达,得到重组酶Agal在大肠杆菌D115a、DH10B和BL21中的比活分别为28.08units/mg、19.44 units/mg和13.85 uni ts/mg。重组质粒pBV-agal在E.coliBL21中稳定性较好。纯化后的重组酶蛋白亚基分子量约为67 KDa,最适反应温度为40~45℃,酶在40℃以下稳定,60℃仅剩余5%的酶活性,70℃时失去所有的酶活性:最适反应pH为4.0~4.4,酶在pH 3.6~6.0范围内稳定。酶对p-硝基苯酚α-Q-半乳糖苷的(K=1.43retool/L,Vmax=35.71μmoll/(L•min);对蜜二糖的Ko=261mmol几,Vmax=63.69μmol/(L•min)。结果说明本研究中的Agal与已经报道的短双歧杆菌的α-D-半乳糖苷酶有较大差异,是一种存在于同一菌体中新发现的α-D-半乳糖苷酶。
双歧杆菌, α-D-半乳糖苷酶, 温度诱导, 表达
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肖敏, 钱卫, 王肇颖, 韩波, 杜桂彩, 李永贵
山东大学学报(理学版),2004,6(3):111~115,-0001,():
-1年11月30日
番茄红素是一种具有多种生理功能的类胡萝卜素,通常从番茄的果实中提取,价格昂贵。一些光合细菌也可以产番茄红素,从而使得利用微生物发酵法生产低成本番茄红素成为可能。本文通过正交实验等方法研究了1株紫色非硫细菌7-1的生长及产番茄红素的最佳培养条件在以0.4%的乳酸钠为碳源,0.05%的谷氨酰胺为氮源,Mg2+10ppm,并添加0.1%的酵母粉作为生长因子的改良RcvBN培养基中,7-1茵发酵液在72h内茵浓度可达5.08×1010个/mL,紫外吸收光谱表明细胞内番茄红素的含量明显提高,高效液相色谱法测定出细胞内番茄红素的含量为398.7 mg/100g茵体干重。
番茄红素, 光合细菌, 培养条件, 高效液相色谱
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【期刊论文】Reassembled Biosynthetic Pathway for a Large-scale Synthesis of CMP-Neu5Ac
肖敏, Jing Song, Hesheng Zhang, Bingyuan Wu, Yingxin Zhang, Hanfen Li, Min Xiao and Peng George Wang, *
Mar. Drugs 2003, 1, 34-45,-0001,():
-1年11月30日
CMP-Neu5Ac is an important sugar nucleotide for biosynthesis of sialic acid and its conjugates. In this paper, a large-scale production system of CMP-Neu5Ac by a single strain is reported. The co-expression of Neu5Ac aldolase (EC4.1.3.3) and CMPNeu5Ac synthetase (EC 2.7.7.43) was achieved by constructing individual genes into one plasmid and having a single culture that has both NeuAc aldolase and CMP-Neu5Ac synthetase activities. Overall this system only employed N-acetylmannosamine, excess of pyruvate and CTP to produce CMP-Neu5Ac. This work has demonstrated that a largescale synthesis of sialic acid-derived oligosaccharides could be achieved economically and efficiently through a single, biosynthetic pathway engineered microorganism.
biosynthesis, cytidine β-monophospho-N-acetylneuraminic acid, NeuAc aldolase, CMP-NeuAc synthetase
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【期刊论文】一株曲霉 (Aspergillus sp1 AF)β-半乳糖苷酶的转糖基活性研究
肖敏, 袁绍鹏, 肖, 敏, 孙正, 钱新民
食品与发酵工业,(11):31~34,-0001,():
-1年11月30日
确定了1株曲霉的β-半乳糖苷酶产酶培养基的氮源为蛋白胨1%、酵母膏0.3%、KNO3 0.2%,碳源为葡萄糖1%, 培养条件为30℃摇床培养48h。碳源实验证明,β-半乳糖苷酶在该菌株中属组成型表达。研究了该菌株的β-半乳糖苷酶转糖基反应体系中的pH、乳糖浓度、反应温度、反应时间对转糖基作用的影响,并利用薄层层析、高效液相层析技术分析了转糖基反应的产物。
β-半乳糖苷酶, 转糖基作用, 低聚半乳糖
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肖敏, 陈建爱, , 陈为京
,-0001,():
-1年11月30日
实验表明,不同碳氮比、碳源、氮源、微量元素量,均影响木霉的生长和产孢,木霉的培养最佳营养条件是碳氮比为24∶1,碳源为淀粉,氮源为天门冬酰胺,Fe元素含量为5mg/L,K、P、s为完全培养基含量,Mg元素含量尽可能少,加入少量维生素也促进木霉的生长,提高木霉的产孢量。
木霉, 营养条件, 孢子
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肖敏, 陈建爱, , 王未名, 陈为京, 孙永堂
核农学报,2002,16(5):305~309,-0001,():
-1年11月30日
本文以木霉诱变菌株T5、T0803、T1010、T1003为实验对象,利用正交实验优化组合其生长的环境条件,方差分析表明各处理间差异显著,每个因素的设计差异都显著。最佳组合是菌株T1010,培养菌丝最适温度30℃,pH值6, 高温培养3d 转入低温20℃培养,农药组合为代森锰。T1010液体振荡培养,在正常的生长范围内氧气对生长量的影响不大。
木霉, 发酵条件
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【期刊论文】沼泽红假单胞菌GroE基因高保守区DNA片段的克隆, 测序和特性分析
肖敏, 朱崇日, 钱新民, 郑平
山东大学学报(理学版),2002, 8(4):1~5,-0001,():
-1年11月30日
利用原核微生物GroE 基因特定区域高保守性设计了简并引物,以Rhodopseudomonas palustris Y6 的染色体为模板进行PCR 扩增,得到片段594bp 的产物. 将该DNA 片段连接到pUC-T 载体多克隆位点上,转化大肠杆菌DH5α菌株,得到阳性重组子。经Southern 杂交验证,已克隆的594bpDNA 片段来自Rhodopseudomonas palustris。 测序结果分析表明该片段是细菌groE 基因高保守区。
Rhodopseudomonas palustris, groE 基因高保守区, 克隆, 序列分析
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肖敏, 吕玉泉, 王鹏, 曲音波
食品科学, 2002(9):144~147,-0001,():
-1年11月30日
人乳低聚糖是一类存在于人乳中的天然低聚糖。它不仅具有抵御肠道病原微生物感染,而且还有维持肠道生态平衡的双重作用。其它许多生物学功能正在研究中。在人类与病原菌的抗争中,人乳低聚糖的开发和应用给了我们一个新的理念,并提供了一条有效的途径。
人乳低聚糖, 生物学功能
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肖敏, 刘树峰, 朱崇日, 钱新民
《生物工程进展》, 2001(3):50~53,-0001,():
-1年11月30日
大肠杆菌(Escherichia coli) 棉子糖(raf) 操纵子位于质粒,它编码能够使大肠杆菌吸收和利用三糖棉子糖的蛋白,即一个主动运输系统(Raf 透性酶),α-半乳糖苷酶和蔗糖水解酶。raf操纵子包括启动子rafP,调节基因rafR,操纵基因rafO以及rafA,rafB,rafD 三个结构基因。这个操纵子由一个阻遏蛋白RafR 负控制,同时以环腺苷2代谢降解物基因激活蛋白(cAMP2CAP) 为中介的正调控也参与调节。
棉子糖操纵子, 结构, 功能, 调控
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肖敏, 刘树峰, 朱崇日, 钱新民
中华微生物学和免疫学杂志,2001,5(3):307~311,-0001,():
-1年11月30日
目的 研究短双歧杆菌(Bifidobacterium breve) α-D-半乳糖苷酶的纯化及性质。方法 采用硫酸铵分级沉淀及柱层析法纯化酶蛋白,垂直板状SDS2PAGE 和native gradient PAGE 检查蛋白纯度。结果 native gradient PAGE 电泳后活性染色确定无细胞粗酶液中含有一种α-D-半乳糖苷酶,纯化后的酶蛋白是一个相对分子质量(Mr) 约为156×103 的双亚基蛋白质,等电点pH为5.3,最适反应温度为37℃,在40℃以下稳定,70℃时失去所有的酶活性。最适反应pH 为5.5~6.5,酶在pH5.5~9.5 范围内稳定。Hg+、Cu2 +、Ag+ (各1mmol/L) 和PCMB (0.01mmol/L) 强烈抑制酶活性,Co2 +、Mg2 +、Ca2 +、Mn2 +、Zn2 + (各1mmol/L) 、EDTA 和DTT(0.01mmol/L) 对酶活性没有抑制。酶专一性水解α-D-半乳糖苷键。酶对p2硝基苯酚2α-D-半乳糖苷、m2硝基苯酚2α-D-半乳糖苷和o2硝基苯酚2α-D-半乳糖苷的Km分别为0.168mmol/L、1.07mmol/L 和0.456mmol/L, Vmax 分别为4.55μmol/ min、0.378μmol/ min 和0.614μmol/ min。结论 B. breve 的α-D-半乳糖苷酶与少数国外报道的其他双歧杆菌的α-D-半乳糖苷酶有相似之处,也有不同点。其Mr 不同,在60℃之内的热稳定性明显较好。
双歧杆菌, α-D-半乳糖苷酶, 纯化
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